[发明专利]一种基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法

权利要求书

1.一种基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于检测方法包括如下步骤：

a)将 DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒在缓冲液1中混合并孵育；

b)将多个不同浓度的转录因子与步骤a)得到的混合系统孵育反应；

c)测定样品在537 nm激发波长下，627 nm处的荧光值；或在770 nm激发波长下，833 nm处的荧光值；利用测得的I₆₂₇或I₈₃₃的值，获得转录因子浓度与荧光强度的线性关系；

d）将待测样品根据步骤c)所得到的线性关系与待测样品获得的荧光强度，得到待测样品中转录因子的浓度。

2.根据权利要求1所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于所述的缓冲液1具体配方是10 mM Na₂HPO₄/NaH₂PO₄、100 mM CH₃COONa和10 mM Mg(CH₃COOH)₂, pH=7.4。

3.根据权利要求1所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于用以下DNA序列制备AgP1和AgP2两种DNA-银纳米簇：

AgP1模板：ACCCGAACCTGGGCTACCACCCTTAATCCCCGGGACTTTCCTCAAAAATTCTGCCTTGGAAAGTCCC

AgP2模板：CCCACCCACCCTCCCAGGACATGCCCGGGCATGTCCTCAAAAATTCTGCCTTGGACATGCCCGGGCATGTCC。

4.根据权利要求3所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于，步骤a）中DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒在缓冲液1中混合步骤为：用缓冲液1将聚吡咯纳米粒稀释至15 mg/mL，随后，将1 μL, 10 μM的AgP1，1 μL, 10 μM的AgP2与50 μL,15 mg/mL的聚吡咯纳米粒混合。

5.根据权利要求1所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于所述的孵育为在36-38°C下孵育10-15min。

6.根据权利要求5所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于所述的孵育为在37 °C下孵育10 min。

7.根据权利要求1所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于，转录因子为NF-κB p50和p53，转录因子NF-κB p50的浓度范围是0.1 nM-50 nM，转录因子p53的浓度范围是0.15 nM-50 nM。

8.根据权利要求7所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于，步骤b）具体为：每52 μL步骤a）制备的混合体系与体积为38μL浓度为0.1 nM-50nM的转录因子NF-κB p50溶液或体积为38μL浓度为0.15 nM-50 nM的转录因子p53混合，再加入10 μL缓冲液3，在37℃下反应1 h；其中，缓冲液3为10mM三羟甲基氨基甲烷–醋酸,100mM 氯化钾,2mM 氯化镁, 0.1mM EDTA和占缓冲液3体积分数10%的丙三醇, pH7.5。

9.根据权利要求1所述的基于DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法，其特征在于，步骤c）具体为：将样品在激发波长为537 nm，测定627 nm处的荧光值；或770 nm激发波长下，测定833 nm处的荧光值；扫描速度为1200 nm/min，光电倍增管电压为750 V，激发狭缝和发射狭缝宽度为5 nm，利用测得的I₆₂₇或I₈₃₃的值，获得转录因子浓度与荧光强度的线性关系。