[发明专利]基于TiO2 有效
| 申请号： | 201810109238.6 | 申请日： | 2018-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN108318477B | 公开（公告）日： | 2020-06-26 |
| 发明（设计）人： | 衣欢;戴宏;郑红利;沈荣凯;高利红;林丹玫 | 申请（专利权）人： | 福建省妇幼保健院 |
| 主分类号： | G01N21/76 | 分类号： | G01N21/76 |
| 代理公司： | 北京劲创知识产权代理事务所(普通合伙) 11589 | 代理人： | 张铁兰 |
| 地址： | 350003 福建省福州*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 tio base sub | ||
1.一种基于TiO2金属有机框架材料(TiO2 MOFs)的呕吐毒素竞争型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)玻碳电极(GCE)首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；
(2)取1mL 5mg/ml碳纳米角(CNHs)与2.0mL1.0 mg/mL 3,4,9,10-苝四甲酸(PTCA)溶液混合，在黑暗条件下反应12h，经离心、洗涤，再分散制得PTCA@CNHs复合物溶液，随后，取2mL浓度比为4:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)混合液加入到上述复合物溶液中室温震荡过夜，以达到活化羧基的目的；然后将5mL5.56mol/L 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)加入到上述混合液中，在4℃下震荡12h，后经离心、洗涤，再分散制得APTES-PTCA@CNHs复合物；滴加5μL浓度为5mg/ml APTES-PTCA@CNHs复合物悬浮液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得APTES-PTCA@CNHs修饰玻碳电极；
(3)滴加5μL浓度为5mg/ml呕吐毒素(DON)于步骤(2)所制的修饰电极表面，将其置于红外灯下烘干，冷却至室温，制得Ag/APTES-PTCA@CNHs修饰玻碳电极；
(4)将步骤(3)制备的修饰电极置于浓度为1.0wt.％的BSA溶液中孵育30min，以封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，并保存在4℃冰箱中备用；
(5)取体积比为1:1的5mg/mL TiO2 MOFs溶液与1.0×10-2mol/L钌联吡啶(Ru(bpy)32+)在室温下混合震荡5h，洗涤、离心制得TiO2MOFs@Ru(bpy)32+复合物；然后将上述复合物重新分散在去离子水中，再分别加入体积比为1:1的5wt.％戊二醛与1mg/ml呕吐毒素抗体(Ab)溶液，混合震荡1h，经离心、洗涤、再分散得到TiO2 MOFs@Ru(bpy)32+@Ab复合物溶液；取70μL1.0 mmol/L巯基-β-环糊精β-CD溶液加入到上述复合物溶液，在4℃下震荡90min，完成β-CD的自组装，经离心、洗涤、再分散制得β-CD@TiO2 MOFs@Ru(bpy)32+@Ab复合物溶液，然后在上述溶液中加入1.0wt.％BSA封闭非特异性吸附位点，最后加入70μL 1.0×10-6mol/L氟代香豆素硅酞菁(F-couSiPcs)在12℃下反应90min，经离心、洗涤、再分散制得整合型电致化学发光探针F-couSiPcs@TiO2 MOFs@Ru(bpy)32+@Ab复合物溶液，储存在4℃冰箱中备用；
(6)将步骤(4)获得的修饰电极浸入不同浓度的呕吐毒素(DON)标准溶液中，并同时滴加80μL步骤(5)制备的整合型电致化学发光探针F-couSiPcs@TiO2 MOFs@Ru(bpy)32+@Ab复合物溶液，在4℃冰箱中孵育40min，用去离子水冲洗电极表面，制得F-couSiPcs@TiO2MOFs@Ru(bpy)32+@Ab/BSA/Ag/APTES-PTCA@CNHs修饰玻碳电极,并保存在4℃冰箱中备用。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的3,4,9,10-苝四甲酸(PTCA)由下述方法制备：将5ml 0.1mol/L氢氧化钠溶液加入到5ml 5mg/mL 3,4,9,10-四羧酸二酐(PTCDA)溶液中，溶液颜色变为黄绿色后逐滴加入0.5mol/L盐酸溶液直至暗红色沉淀完全析出，经离心、洗涤数次，得到3,4,9,10-苝四甲酸(PTCA)。
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