[发明专利]一种利用姜黄素抑制肝癌的新靶点及用途

说明书

本发明属于医疗技术领域，公开了一种利用姜黄素抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的新靶点及用途，通过细胞培养与细胞热应激模型的建立，CCK‑8试验，划痕实验，Transwell迁移实验，流式细胞仪细胞周期分析，流式细胞仪细胞凋亡分析，Western blot分析，酶联免疫吸附试验等方法，进行统计分析。表明热应激显著增加细胞外HSP70的水平和TLR4蛋白的表达，显著降低细胞内HSP70的表达；姜黄素抑制人肝癌细胞系HepG2细胞的增殖、侵袭和转移，促进细胞凋亡，使细胞阻滞于S期，并显著降低热应激HepG2细胞外HSP70(eHSP70)水平，去除姜黄素后，eHSP70再次增加。

技术领域

本发明属于医疗技术领域，尤其涉及一种利用姜黄素抑制DAMP分子 HSP70及TLR4信号抑制肝癌的新靶点及用途

背景技术

姜黄素具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、甚至抗神经变性等特性，已被广泛报道。姜黄素的作用机制尚不清楚，尤其是在抑制肝癌方面。然而，活化的NF-κB信号通路与肝癌进展有关，HSP70可以与TLR4受体结合激活NF- κB。免疫学“危险理论”表明DAMPs与炎症、自身免疫性疾病、肿瘤以及各种老化疾病相关，细胞外HSP70是典型的DAMP分子，能作为内源性免疫刺激因子刺激免疫系统产生免疫应答。许多与衰老有关的疾病都有着共同的起源和特点，如基因组改变，端粒和表观遗传学异常，炎症和免疫损伤，因此，关注 DAMPs将有可能为疾病的研究提供一个新方向。

综上所述，现有技术存在的问题是：有报道Curcumin能抑制肝癌的发生，姜黄素通过抑制DAMP分子eHSP70抑制TLR4信号，从而抑制NF-κB属于技术空白。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种利用姜黄素抑制DAMP分子 HSP70及TLR4信号抑制肝癌的新靶点及用途。

本发明是这样实现的，一种通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的姜黄素新靶点及用途，所述通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的药物为姜黄素。

本发明的另一目的在于提供一种由所述通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的抗肿瘤新途径新靶点。

本发明的另一目的在于提供一种所述通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4 信号抑制肝癌的药物使用的细胞培养与热应激细胞模型，所述细胞培养与热应激细胞模型为，细胞培养：使用RPMI-1640完全培养基培养HepG2细胞，完全培养基含90％的RPMI-1640培养基，10％胎牛血清，100单位/毫升的青/链霉素，置于37℃，5％CO₂的培养箱中培养；待细胞生长至融合度80％～90％时，用 0.25％胰蛋白酶消化细胞，进行1:2～1:3细胞传代；热应激：将HepG2细胞置于 43℃环境中加热80min，为热耐受HepG2细胞；用完全培养基稀释姜黄素，姜黄素的处理浓度为20μM～100μM；

本发明的另一目的在于提供一种所述细胞培养与热应激细胞模型的建立方法，所述细胞培养与热应激细胞模型的建立方法包括：

细胞培养：使用RPMI-1640完全培养基培养HepG2细胞，完全培养基中含 90％的RPMI-1640培养基，10％胎牛血清，100单位/毫升的青/链霉素，置于37 ℃，5％CO₂的培养箱中培养；待细胞生长至融合度80％～90％时，用0.25％胰蛋白酶消化细胞，进行1:2～1:3细胞传代；热应激：将HepG2细胞置于43℃环境中加热80min，为热耐受HepG2细胞；用完全培养基稀释姜黄素，姜黄素的处理浓度为20μM～100μM；