[发明专利]一种利用姜黄素抑制肝癌的新靶点及用途在审
| 申请号： | 201810103392.2 | 申请日： | 2018-02-01 |
| 公开（公告）号： | CN108324702A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 任碧琼;罗书笛;邹国英 | 申请（专利权）人： | 任碧琼 |
| 主分类号： | A61K31/12 | 分类号： | A61K31/12;A61P35/00;C12N5/09;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 410000 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 姜黄素 热应激 流式细胞仪 细胞凋亡 细胞 靶点 肝癌 细胞培养 酶联免疫吸附试验 人肝癌细胞系 细胞周期分析 医疗技术领域 侵袭和转移 划痕实验 细胞阻滞 信号抑制 统计分析 去除 增殖 分析 迁移 试验 | ||
1.一种利用姜黄素抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的新用途，其特征在于，所述通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的发生发展，是姜黄素治疗肝癌的新靶点。
2.一种由权利要求1所述姜黄素通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的新靶点。
3.一种如权利要求1所述姜黄素通过抑制DAMP分子HSP70及TLR4信号抑制肝癌的发生发展，采用细胞培养技术并建立热应激细胞模型，其特征在于，细胞培养：使用RPMI-1640完全培养基培养HepG2细胞，完全培养基成分含90％的RPMI-1640培养基，10％胎牛血清，100单位/毫升的青/链霉素，将细胞置于37℃，5％CO2的培养箱中培养；待细胞生长至融合度80％～90％时，0.25％胰蛋白酶消化细胞，进行1:2～1:3细胞传代；热应激：将HepG2细胞置于43℃环境中加热80min，为热耐受HepG2细胞；用完全培养基稀释姜黄素，姜黄素的处理浓度为20μM～100μM。
4.一种如权利要求3所述的细胞培养与热应激细胞模型建立方法，其特征在于，所述细胞培养与热应激细胞模型的建立方法包括：
细胞培养：使用RPMI-1640完全培养基培养HepG2细胞，完全培养基含90％的RPMI-1640培养基，10％胎牛血清，100单位/毫升的青/链霉素，置于37℃，5％CO2的培养箱中培养；待细胞生长至融合度80％～90％时，0.25％胰蛋白酶消化细胞，进行1:2～1:3细胞传代；热应激：将HepG2细胞置于43℃环境中加热80min，为热耐受HepG2细胞；用完全培养基稀释姜黄素，姜黄素的处理浓度为20μM～100μM；
CCK8实验：将5×104个/ml HepG2细胞接种于96孔板中，用含10％胎牛血清，1％抗生素的RPMI 1640完全培养基，置于37℃5％CO2的培养箱中培养24h；采用浓度为20μM～100μM的姜黄素分别作用HepG2细胞24h、48h、72h后，每孔加入10μL的CCK-8溶液，置于培养箱中培养1小时，用酶标仪测定450nm处吸光度。
5.如权利要求4所述的细胞培养与热应激细胞模型建立方法，其特征在于，根据公式计算细胞存活率(％)＝(实验组吸光度－空白组吸光度)/(对照组吸光值－空白组吸光度)×100％。
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