[发明专利]一种快速提取检测植物组织中牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸的方法

说明书

本发明提供一种快速提取检测植物组织中GGPP的方法，包括下述步骤：1)用三元混合溶剂体系对植物组织进行提取，得到提取混合物；2)对提取混合物进行离心处理，取上清液；3)对上清液进行色谱分离并对分离得到的化合物进行质谱检测。本发明具有以下优点：本发明采用的三元混合快速提取溶剂体系制备方法简单、易上手且采购成本低；本发明采用的三元混合快速提取溶剂体系在提取目标化合物GGPP时用时短，1分钟即可，最大程度地减少了样品的降解和损失；本发明采用的化合物分离及检测系统分离用时短、检测灵敏度低，10分钟即可给出化合物的分离色谱图及高分辨质量数，最大程度地保留了化合物本身的物理化学性质，减少了样品的降解和损失。

技术领域

本发明属于生化分析技术领域，具体涉及一种快速提取检测植物组织中牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)的方法。

背景技术

GGPP是甲羟戊酸途径中产生的一类具有重要生物活性的类异戊二烯中间体，在细胞生长、分化、信号转导、抗炎、调节免疫、抗氧化等方面具有举足轻重的作用。在植物体内，GGPP是类胡萝卜素、赤霉素、维生素、叶绿素的前体，也是构建长链类异戊二烯的底物。作为生物样品的中间产物，GGPP多以离子形式存在，并在低浓度时稳定性较差，因此，迫切需要建立简便快速的样品提取和高灵敏度的检测分析方法。现有技术主要分为以下几类：1、将荧光多肽标记GGPP衍生化后通过高效液相色谱检测，方法适用于动物细胞或组织；2、同时采用四种不同的流动相(A：水/甲醇，95:5，v/v，5mM醋酸铵，8mM二甲胺；B：异丙醇/甲醇/水，65：30：5，v/v/v，5mM醋酸铵，8mM二甲胺；C：水/甲醇，95:5，v/v，5mM甲酸铵，0.1％甲酸；D：异丙醇/甲醇/水，65：30：5，v/v/v，5mM甲酸铵，0.1％甲酸)分离GGPP并质谱检测，该方法适用于血液样品；3、将GGPP去磷酸化成为醇，通过同位素标记并高效液相色谱检测，该方法适用于动物组织；4、将GGPP衍生化为醇，经气相色谱质谱联用仪检测，该方法应用于植物组织。

上述实验方法仅有一种对植物组织进行了验证，但样品处理步骤繁琐，容易造成目标物损失，且实验周期耗时长，无法实现高通量大规模检测。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种能够快速提取检测植物组织中的GGPP方法。本方法样品处理操作简单，检测速度快。

本发明所提供的快速提取检测植物组织中GGPP的方法，包括下述步骤：

1)用三元混合溶剂体系对植物组织进行提取，得到提取混合物；

2)对提取混合物进行离心处理，取上清液；

3)对上清液进行色谱分离并对分离得到的化合物进行质谱检测。

上述方法步骤1)中，所述三元混合溶剂体系为环己醇、甲醇、氨水的三元混合体系，其中，氨水的质量浓度可为28.0-30.0％；环己醇与甲醇、氨水的体积比依次可为7-14：8：3-6，具体可为7:4:3。

所述三元混合溶剂体系的混合顺序依次为甲醇、环己醇和氨水。

所述植物组织可为：任何植物的根、茎、叶、花、果实、种子，具体可为丹参毛状根。

所述提取中，三元混合溶剂体系与植物组织的配比可为400-450μL：17.5-22.5mg，具体可为427μL：19.65mg。

所述提取可为快速浸提。

所述提取的时间可为1-3min，具体可为1min。

在对植物组织进行提取前，还包括对植物组织进行预处理的操作。所述预处理的操作为：将植物组织干燥成干燥样品，再将干燥样品粉碎，得到植物组织干粉。

其中，所述干燥具体可为：先对植物组织进行速冻，再将速冻后的样品真空冷冻。