[发明专利]一种高通量蛋白质分析方法及其适用文库

说明书

本发明涉及生物领域，提供了一种高通量蛋白质分析方法及其适用文库。本发明的高通量蛋白质分析方法，为采用带标签的半克隆小鼠文库，以一个或数个标签蛋白抗体对多个不同感兴趣目标蛋白进行平行指示分析，所述带标签的半克隆小鼠文库中，各半克隆小鼠为利用孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠或其有性繁殖后代，所述孤雄单倍体胚胎干细胞含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因，所述半克隆小鼠能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白。本发明为生物大分子的研究提供了一个适于高通量的在体、实时和动态研究的体系。

技术领域

本发明涉及生物领域，特别涉及蛋白组学研究领域，尤其涉及一种高通量蛋白质分析方法及其适用文库。

背景技术

目前通过人类基因组计划已经发现和定位了26000多个编码蛋白质的功能基因，其中尚有42％的基因尚不知道功能，在已知基因中酶占10.28％，核酸酶占7.5％，信号传导占12.2％，转录因子占6.0％，信号分子占1.2％，受体分子占5.3％，选择性调节分子占3.2％，等。发现并了解这些功能基因的作用对于了解生命和新药的筛选都具有重要的意义。在蛋白质功能的研究中，制备相应的抗体成为必不可少的工作，但是抗体的获得存在以下问题：1)制备繁琐，成本高；2)许多蛋白质缺乏抗体；3)不同来源抗体特异性和研究目的不同导致同一蛋白质抗体种类繁多，根据不同实验还要选择不同抗体；4)在细胞内和体内研究蛋白质时，很多抗体都表现得无能为力；5)同一抗体公司的抗体制备批次不同导致可能存在自然差异等等。这些问题导致科研时间和经费的极大浪费，给研究者带来了极大的麻烦，制约了研究进程。

卵子和精子结合形成全能性的受精卵，起始了生命。通过胚胎发育最终形成具有200多种不同体细胞的生命个体，这一过程及其复杂。从受精卵到生物个体发育过程中，细胞时刻都面临选择：保持现有的身份和状态还是转变成另一种身份和状态。细胞身份和状态的维持和变化既受细胞自身内在遗传因素的控制，也受细胞周围环境因素的调节。细胞内外因素的相互作用使得细胞的命运具有可变和转换的特征。生命个体诞生后又会经历一个成长、成熟、衰老的过程，而所有这一切变化的物质基础是包括蛋白质在内的生物大分子。然而，生物大分子如何在生命活动中发挥功能？生物大分子之间如何协同发挥作用？对这些问题的揭示，有助于了解生命，为进一步调控生命，避免疾病提供理论支持。然而，目前对生物大分子的研究缺乏一个适于在体、实时和动态研究的体系。

发明内容

鉴于现有技术的缺点，本发明一方面提供了一种高通量蛋白质分析方法，为采用带标签的半克隆小鼠文库，以一个或数个标签蛋白抗体对多个不同感兴趣目标蛋白进行平行指示分析，在带标签的半克隆小鼠文库中，各半克隆小鼠为利用孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠或其有性繁殖后代，所述孤雄单倍体胚胎干细胞含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因，所述半克隆小鼠能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白。

本发明第二方面还提供了一种适用前述高通量蛋白质分析方法的带标签的半克隆小鼠文库及其构建方法。

本发明的带标签的半克隆小鼠文库中，各半克隆小鼠表达的感兴趣目标蛋白均与标签蛋白融合表达，各半克隆小鼠均为利用孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠或其有性繁殖后代，所述孤雄单倍体胚胎干细胞含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因。

本发明带标签的半克隆小鼠文库或来自所述文库的半克隆小鼠可用于蛋白质分析、蛋白功能研究或药物研究领域。

本发明第三方面还提供了适用于前述高通量蛋白质分析方法的带标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库及其构建方法。

本发明的标签的孤雄单倍体胚胎干细胞文库中，各孤雄单倍体胚胎干细胞均含有表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白的基因，所述孤雄单倍体胚胎干细胞注入卵子后培育获得的半克隆小鼠能表达感兴趣目标蛋白与标签蛋白的融合蛋白。