[发明专利]用于检测印第安纳沙门菌的引物组、该引物组的用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及用于检测印第安纳沙门菌的引物组、该引物组的用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法。引物组包括三对引物，DP1s和DP2a、CF和CR以及Biotin‑DFs和6‑FAM‑DRa引物，所述DP1s的序列如SEQ ID NO.1所示，所述DP2a的序列如SEQ ID NO.2所示；所述CF的序列如SEQ ID NO.3所示，所述CR的序列如SEQ ID NO.4所示，所述Biotin‑DFs的序列如SEQ ID NO.5所示，所述6‑FAM‑DRa的序列如SEQ ID NO.6所示，所述Biotin‑DFs的5’端标记有生物素荧光基团，所述6‑FAM‑DRa的5’端标记有6‑羧基荧光素基团。本发明的优点在于，本发明提供的用于检测印第安纳沙门菌的引物组和包含该引物组的试剂盒可以特异性检测印第安纳沙门菌，且包含该引物组的试剂盒最低能检测10⁰fg/μL的印第安纳沙门菌基因组。

技术领域

本发明属于细菌检测技术领域，具体涉及用于检测印第安纳沙门菌的引物组、该引物组的用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法。

背景技术

印第安纳沙门菌(1,4,12:z:1,7)属于沙门菌属，革兰氏阴性肠杆菌科。该血清型沙门菌为人畜共患病病原菌，其宿主谱广泛，能感染猪、羊和鸡等畜禽，当人们接触染菌的活畜禽或食用染菌的畜禽肉引起感染，导致严重的腹泻和呕吐症状，严重威胁着人类健康和肉质食品安全。目前，一般采用传统的分离鉴定和血清型鉴定印第安纳沙门菌，这类方法鉴定周期长、费时费力，不能满足快速检测的要求。因此，研发一种快速且灵敏的印第安纳沙门菌的检测试剂盒刻不容缓。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种用于检测印第安纳沙门菌的引物组、该引物组的用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法。

本发明所采用的技术方案为：

一种用于检测印第安纳沙门菌的引物组，所述引物组包括三对引物，其中第一对引物为DP1s和DP2a，第二对引物为CF和CR，第三对引物为Biotin-DFs 和6-FAM-DRa，所述DP1s的序列如SEQ ID NO.1所示，所述DP2a的序列如 SEQ ID NO.2所示；所述CF的序列如SEQ ID NO.3所示，所述CR的序列如 SEQ ID NO.4所示，所述Biotin-DFs的序列如SEQ IDNO.5所示，所述6-FAM-DRa的序列如SEQ ID NO.6所示，所述Biotin-DFs的5’端具有生物素荧光基团标记，所述6-FAM-DRa的5’端有6-羧基荧光素基团标记。

本发明还提供了一种用于检测印第安纳沙门菌的试剂盒，包括前述本发明的引物组、PCR扩增试剂、阳性质控品和阴性质控品，其中阳性质控品为印第安纳沙门菌基因组DNA，所述阴性质控品为双蒸水。

上述用于检测印第安纳沙门菌的试剂盒，所述PCR扩增试剂包括浓度为 10mM/L的Deoxynucleotide Solution Mix、浓度为100mM/L的Magnesium Sulfate Solution、浓度为10×的Isothermal Amplification Buffer和浓度为8.0U/μL的Bst 3.0DNA Polymerase。

本发明还提供了一种采用上述试剂盒检测印第安纳沙门菌的方法，包括以下步骤：

(1)准备待测DNA样品：按常规DNA提取方法提取待测样本的DNA；

(2)配置三组PCR反应液：第一组依次加入引物组包含的三对引物、PCR 扩增试剂和待测DNA样品；第二组依次加入引物组包含的三对引物、PCR扩增试剂和阳性质控品；第三组依次加入引物组包含的三对引物、PCR扩增试剂和阴性质控品；

(3)PCR反应：将步骤(2)中配置好的三组PCR反应液离心混匀，分别放入恒温水浴锅中进行PCR反应；

(4)检测：将反应完成的三组PCR反应液分别滴加在核酸检测试纸条上，判断结果。