[发明专利]用于检测印第安纳沙门菌的引物组、该引物组的用途、包含该引物组的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.用于检测印第安纳沙门菌的引物组，其特征在于：所述引物组包括三对引物，其中第一对引物为DP1s和DP2a，第二对引物为CF和CR，第三对引物为Biotin-DFs和6-FAM-DRa，所述DP1s的序列如SEQ ID NO.1所示，所述DP2a的序列如SEQ ID NO.2所示；所述CF的序列如SEQ ID NO.3所示，所述CR的序列如SEQ ID NO.4所示，所述Biotin-DFs的序列如SEQ IDNO.5所示，所述6-FAM-DRa的序列如SEQ ID NO.6所示，所述Biotin-DFs的5’端有生物素荧光基团标记，所述6-FAM-DRa的5’端有6-羧基荧光素基团标记。

2.一种用于检测印第安纳沙门菌的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物组、PCR扩增试剂、阳性质控品和阴性质控品，其中阳性质控品为印第安纳沙门菌基因组DNA，所述阴性质控品为双蒸水。

3.根据权利要求2所述的用于检测印第安纳沙门菌的试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增试剂包括浓度为10mM/L的Deoxynucleotide Solution Mix、浓度为100mM/L的MagnesiumSulfate Solution、浓度为10×的Isothermal Amplification Buffer和浓度为8.0U/μL的Bst 3.0DNA Polymerase。

4.一种采用权利要求3所述的试剂盒检测印第安纳沙门菌的非诊断目的的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)准备待测DNA样品：按常规DNA提取方法提取待测样本的DNA；

(2)配置三组PCR反应液：第一组依次加入引物组包含的三对引物、PCR扩增试剂和待测DNA样品；第二组依次加入引物组包含的三对引物、PCR扩增试剂和阳性质控品；第三组依次加入引物组包含的三对引物、PCR扩增试剂和阴性质控品；

(3)PCR反应：将步骤(2)中配置好的三组PCR反应液离心混匀，分别放入恒温水浴锅中进行PCR反应；

(4)检测：将反应完成的三组PCR反应液分别滴加在核酸检测试纸条上，判断结果。

5.根据权利要求4所述的检测印第安纳沙门菌的非诊断目的的方法，其特征在于：步骤(3)中所述PCR 反应的反应温度为63℃，反应时间为1h。

6.根据权利要求5所述的检测印第安纳沙门菌的非诊断目的的方法，其特征在于：步骤(2)中配置所得三组PCR反应液的体积均为25μL；每组PCR反应液中各组分的加样量为：Isothermal Amplification Buffer为2.5μL，Deoxynucleotide Solution Mix为3.5μL，Magnesium Sulfate Solution为1.5μL，Bst 3.0DNA Polymerase 为1.0μL，DP1s为1.0μL，DP2a为1.0μ L，CF为0.5μL，CR为0.5μL，Biotin-DFs为0.25μL，6-FAM-DRa为0.25μL，待测DNA样品或阳性 质控品或阴性质控品为2.0μL，余量用双蒸水补齐。

7.一种如权利要求1所述的引物组在检测印第安纳沙门菌中的应用，其特征在于，所述应用为引物组在检测印第安纳沙门菌中非诊断目的的应用。

8.一种如权利要求1所述的引物组在制备试剂盒中的应用，其特征在于，所述引物组在用于制备检测印第安纳沙门菌的试剂盒中的应用。