[发明专利]一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法

权利要求书

1.一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法，其特征在于：包括如下步

骤：

S1：无菌苗的获得：将种子置于37℃-40℃恒温摇床上震荡浸泡24-36h；在

无菌超净台上，用75%酒精灭菌30s，无菌水冲洗3 次，10%NaClO 溶液灭菌12-15min，无菌水彻底冲洗6 次，将种子播种于MS 培养基中培养，所述MS 培养基为不含任何激素的MS培养基，培养基pH 值为5.8；

S2：茎段的伸长以及获得：种子培养7d 开始萌芽，15-25d 后生长成无菌苗，

将无菌苗切断接种到添加BA 1mg/L + NAA0.1mg/L+蔗糖25-30 g/L+ 琼脂5-6g/L 的MS 培养基中培养，培养15-28 天后，切取茎段作为外植体；

S3：茎段的诱导及伸长：将外植体接种到添加TDZ 1-7mg/L+BA 1-2 mg/L+2,4-D 0.5-0.1 mg/L + IBA 0.5-0.1 mg/L + 蔗糖25g/L + 琼脂5g/L 的MS 培养基中诱导不定芽，接种时茎段垂直插入培养基；培养15-25d 后，茎段上开始由黄绿色愈伤变成绿色芽点时，将外植体转移到添加BA 1-3mg/L + NAA0.1-0.3mg/L+蔗糖25g/L + 琼脂5g/L 的MS 培养基中诱导不定芽伸长；

S4：生根培养：待不定芽伸长到3-4cm 时，切取不定芽接种于MS + NAA 0.1mg/L + 蔗糖25-30g/L + 琼脂5-6g/L 的生根培养基中诱导生根，培养基pH 为5.8；

S5：炼苗及移栽：生根培养20d 后，不定芽长出多条根，将培养苗从培养瓶

中挖出，洗净根上的培养基，将培养苗在自来水中浸泡2h，移栽到经灭菌的泥炭

土上，在营养杯上套上塑料袋保湿，3d 后慢慢地移开塑料袋，按生长需求浇水。

2.根据权利要求1 所述的一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法，其

特征在于：步骤S1 中，培养温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h。

3.根据权利要求1 所述的一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法，其

特征在于：步骤S3 中，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间

12h。

4.根据权利要求1 所述的一种以黄粱木茎段为外植体的高效再生方法，其特征在于：步骤S4 中，培养基pH 为5.8，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h。