[发明专利]一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法及结构部分表征及其应用

说明书

本发明涉及一种大石花菜多糖及其制备方法和用途，属于天然高分子领域。本发明提供一种从大石花菜中提取分离多糖的方法、该多糖的化学结构及其用途。利用GPC测定平均相对分子量和GC‑MS分析单糖组成，发现本发明大石花菜多糖A‑11平均相对分子量为28807Da，主要由木糖和半乳糖组成，还发现痕量的鼠李糖、阿拉伯糖、岩藻糖、阿洛糖、果糖，葡萄糖和甘露糖。同时，本发明的大石花菜多糖A‑11，显著抑制LPS诱导THP‑1产生的细胞毒性，保护细胞免受损害；又能够调节免疫信号通路中信号因子MyD88和TRAF‑6的表达从而提高人体免疫力。

技术领域

本发明涉及天然高分子技术领域，具体地说，是一种大石花菜多糖的制备方法、结构部分表征和用途。

背景技术

石花菜，又名海冻菜、石华、琼枝、草珊瑚、鸡毛菜等，主要分布在我国的台湾岛、海南岛以及广东沿岸，目前是制作琼胶的主要原料。据中医典籍记载，石花菜可用于治疗支气管炎、瘿瘤、肠炎、痔血等，是一种药食兼用的藻类。目前石花菜的主要利用方式有直接食用及制作琼胶，广泛应用在食品化工等行业。石花菜多糖已有一定研究，研究表明，石花菜多糖具有良好的生物活性，例如抗氧化活性、降血糖活性、降血脂活性、抑菌活性等。

大石花菜同属石花菜，产于中国浙江、福建沿海，是北太平洋西部特有的种。目前，对大石花菜的研究主要集中在养殖技术及范围分布方向，中国专利文献CN107259558A公开了一种采用酶解的方法从石花菜中提取多糖。而关于本发明的大石花菜多糖的提取制备、纯化以及其具有的生理活性方面在国内外尚未报道。

发明内容

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种大石花菜多糖的制备方法。

本发明的第二个目的是，提供一种大石花菜多糖。

本发明的第三个目的是，提供一种大石花菜多糖的应用。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)大石花菜的水提液浓缩后加入乙醇，收集沉淀；

(2)步骤(1)获得的沉淀去除蛋白质得到大石花菜粗多糖；

(3)步骤(2)获得的大石花菜粗多糖经阴离子交换柱层析得到大石花菜多糖A-1；

(4)大石花菜多糖A-1经凝胶柱层析得到大石花菜纯多糖A-11，即具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

优选地，步骤(2)通过Sevage法去除蛋白质。

优选地，步骤(3)为：步骤(2)获得的大石花菜粗多糖经DEAE-52阴离子交换柱层析、浓缩、透析、冷冻干燥得到大石花菜多糖A-1。

优选地，步骤(4)为：大石花菜多糖A-1经Sephadex G-100凝胶柱层析、浓缩、透析、冷冻干燥得到大石花菜纯多糖A-11，即具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

优选地，步骤(3)的柱层析步骤中依次用浓度为0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0mol/LNaCl溶液洗脱；步骤(4)的柱层析步骤中用0.3mol/LNaCl溶液洗脱。

优选地，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)将干燥大石花菜粉碎、过20目筛；大石花菜粉末按照料液比1:30，80℃超声辅助提取2.5小时，得水提液，60℃减压浓缩，向浓缩液加入两倍体积的无水乙醇，室温下静置12小时沉淀多糖，8000rpm、10分钟、4℃离心收集沉淀；

(2)蒸馏水溶解沉淀，使用Sevage法除去水提液蛋白质，静置12小时，8000rpm离心10分钟取上清液，随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩冷冻干燥得粗多糖；