[发明专利]一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法及结构部分表征及其应用

权利要求书

1.一种具有免疫调节作用的大石花菜多糖的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：

(1)将干燥大石花菜粉碎、过20目筛；大石花菜粉末按照料液比1:30，80℃超声辅助提取2.5小时，得水提液，60℃减压浓缩，向浓缩液加入两倍体积的无水乙醇，室温下静置12小时沉淀多糖，8000rpm、10分钟、4℃离心收集沉淀；

(2)蒸馏水溶解沉淀，使用Sevage法除去水提液蛋白质，静置12小时，8000rpm离心10分钟取上清液，随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩冷冻干燥得粗多糖；

(3)取上述粗多糖配置成浓度为20mg/mL的溶液，0.45μm滤膜过滤后，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，上样量为5mL，依次用浓度为0、0.1、0.3、0.5、0.7、1.0mol/LNaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，6分钟每管；采用苯酚-硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集0.3mol/LNaCl溶液洗脱后的组分，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得到大石花菜多糖A-1；

(4)上述大石花菜多糖A-1配置成浓度为50mg/mL的溶液，0 .22μm滤膜过滤后，经Sephadex G-100柱分离，上样量为5mL，用0.3mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，6分钟每管；采用苯酚-硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第5-35管合并后经浓缩、透析、冷冻干燥分别得大石花菜纯多糖A-11，即具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

2.根据权利要求1所述的制备方法制得的具有免疫调节作用的大石花菜多糖。

3.根据权利要求2所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖，其特征在于，所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖的平均相对分子量为28807Da，主要由木糖和半乳糖组成。

4.根据权利要求2、3任一所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖在制备免疫调节剂中的应用。

5.根据权利要求2、3任一所述的具有免疫调节作用的大石花菜多糖在制备抵抗LPS诱导THP-1产生的细胞毒性的药物中的应用，其中大石花菜多糖浓度为5ug/mL。