[发明专利]一种共表达细胞因子IL-21的双特异性嵌合抗原受体、质粒、CIK细胞及MM病应用

说明书

本发明公开了一种共表达细胞因子IL‑21的双特异性嵌合抗原受体、质粒、CIK细胞及应用，共表达细胞因子IL‑21的双特异性嵌合抗原受体(MmCAR)，由CD8leader、BCMAscFv、CD8的铰链区和跨膜区、4‑1BB共刺激信号区、CD3ζ胞内信号区、T2A自剪切区、IL‑21表达区、T2A自剪切区、CD8leader、CD138scFv、CD8的铰链区和跨膜区、4‑1BB共刺激信号区、CD3ζ胞内信号区依次串联构成。本发明可以识别更多类型的肿瘤细胞，且IL‑21的分泌增加CIK细胞的增殖和效应。因此，本发明的MmCAR清除肿瘤群体更彻底，疗效更持久，降低复发及抗原标记转阴的几率。

技术领域

本发明涉及基因技术领域，尤其涉及一种共表达细胞因子IL-21的双特异性嵌合抗原受体、含有该受体的质粒、CIK细胞及MM病应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是以恶性浆细胞聚集骨髓并在血液或尿液中出现单克隆蛋白(M蛋白)为特征的一种恶性疾病，临床特点包括易发感染、肾功能受损、贫血、高钙血症及溶骨性病变。其发病率约占血液恶性肿瘤的13％，多发于老年人，随着我国人口老龄化，MM发病人数有增加的趋势。目前的治疗方案，已使得大多数病人的预后有了明显的改善，但患者最终仍不能幸免于难，更有部分患者对现有的治疗方案没有反应，因此仍需更有效更安全的治疗方法出现。

细胞过继免疫治疗的发展，为治疗MM带来了新的治疗策略，特别是嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞免疫治疗(CAR-T)技术的发展，为临床带来了新的治疗希望。CAR-T是一种结合T细胞免疫治疗和抗体靶向治疗的治疗手段，具有特异性识别并杀伤肿瘤细胞的能力，其突出优点是可以克服MHC限制性。其中，CAR由CD8引导肽、抗原识别区(配体或单链抗体或Fab片段)、跨膜区、以及T细胞的一系列信号转导区(CD28，CD3，CD137胞内信号传导结构域)依次连接而成。

目前治疗MM的CAR主要有Anti-CD138CAR(中国专利：CN105924529A、CN105384821A和CN105820254A)和Anti-BCMA CAR(中国专利：CN106795217A、CN107207598A、CN104379179A和CN105837693A)。临床试验表明：上述CAR-T具有强的肿瘤细胞杀伤能力，大多数患者出现了部分缓解，只有极少数患者出现了完全缓解。这提示CAR-T治疗的疗效不高，其影响因素有很多其中包括CAR的转染效率低、靶向分子的选择不合适、CAR修饰的T细胞增殖率低和肿瘤微环境的抑制等。除此之外，患者完全缓解后也出现了复发及抗原标记转阴等问题。这提示CAR-T治疗的疗效不能长期持续，可能的原因有两个，一是有些肿瘤干细胞可能不表达靶向靶点，所以不能完全根治而再次复发；二是CAR-T作用压力下，可诱导肿瘤细胞发生部分或完全的免疫表型改变，引起靶向靶点表达降低或者沉默，从而耐受CAR-T治疗。

因此，开发一种新的靶向MM病共表达细胞因子IL-21的双特异性嵌合抗原受体，不但具有迫切的研究价值，也具有良好的经济效益和医疗应用潜力，这正是本发明得以完成的动力所在和基础。

发明内容

为了克服上述所指出的现有技术的缺陷，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量创造性劳动后，从而完成了本发明。

具体而言，本发明所要解决的技术问题是：提供靶向MM病共表达细胞因子IL-21的双特异性嵌合抗原受体、质粒、CIK细胞及应用，以提高对MM病的治疗效果。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：