[发明专利]具有治疗急慢性肾盂肾炎和前列腺增生功效的中药复方的质量检测方法

权利要求书

1.一种具有治疗急慢性肾盂肾炎和前列腺增生功效的中药复方的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备

分别精密称取知母皂苷BII、知母皂苷AⅢ、黄柏碱、药根碱、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、芒果苷和新芒果苷的对照品，置于10mL的容量瓶中，用体积浓度70％乙腈定容至刻度，制得质量浓度分别为1006μg/mL、999μg/mL、1288μg/mL、1251μg/mL、4004μg/mL、1775μg/mL、1258μg/mL和1114μg/mL的单个对照品储备液；

分别精密吸取适量的知母皂苷BII对照品储备液、知母皂苷AⅢ对照品储备液、黄柏碱对照品储备液、药根碱对照品储备液、盐酸小檗碱对照品储备液、盐酸巴马汀对照品储备液、芒果苷对照品储备液和新芒果苷对照品储备液至5mL容量瓶，用体积浓度70％乙腈定容，得浓度分别为140.84μg/ml、139.86μg/ml、180.32μg/ml、28.0224μg/ml、500.5μg/ml、19.88μg/ml、311.92μg/ml和125.8μg/ml的混合对照品溶液；

(2)内标溶液的制备

分别精密称取右美沙芬和薯蓣皂苷对照品适量，置于10mL的容量瓶中，用体积浓度70％乙腈定容至刻度，制得质量浓度分别为1111μg/ml、701μg/ml的混合内标储备液，4℃保存，备用；

精密量取0.1ml混合内标储备液至10ml容量瓶中，用体积比为1：3的乙腈和0.2％甲酸水定容至刻度，得质量浓度分别为11.11μg/ml和7.01μg/ml的右美沙芬和薯蓣皂苷的混合内标溶液；

(3)供试品溶液的制备

肉桂粉碎成细粉，备用；

黄柏的提取：称取黄柏药材500g，加体积浓度65％乙醇5000mL，渗漉24h，滤过，回收乙醇，浓缩得黄柏提取物；

知母的提取：称取知母药材500g，加体积浓度65％乙醇2500mL，渗漉24h，药渣再加65％乙醇2500mL回流提取2h，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩得知母提取物；

取肉桂粉细粉50g、黄柏提取物和知母提取物，加甲醇，超声提取，取提取液用甲醇定容，通过0.22μm滤头滤过，取续滤液，加入步骤(2)的混合内标溶液，然后加入用体积比为1：3的乙腈和0.2％甲酸水，涡旋混匀后，离心，取上清液，即得供试品溶液；

(4)线性关系考察

取步骤(1)的混合对照品溶液，依次用体积比为1：3的乙腈和0.2％甲酸水稀释，得到5个依次减小的系列质量浓度的混合对照品溶液；

然后取5个不同质量浓度的混合对照品溶液，分别加入步骤(2)的混合内标溶液和体积比为1：3的乙腈和0.2％甲酸水，涡旋混匀，离心，分别取上清液，然后依次注入超高效液相色谱仪进行检测；以质量浓度为横坐标(X)，对照品与内标峰面积比值为纵坐标(Y)，进行线性回归，得到各成分的回归方程、相关系数及线性范围；

(5)供试品溶液的检测

精密吸取步骤(3)制备得到的供试品溶液，注入超高效液相色谱仪进行检测，通过步骤(4)获得的回归方程，检测供试品溶液中各化学成分的含量；

其中，步骤(4)和步骤(5)超高效液相色谱仪检测的色谱条件为：

色谱柱:预柱Kromasil 100-3.5-C18，色谱柱Kromasil 100-3.5 C₁₈，规格150×2.1mm；流动相A为0.2％甲酸，B为纯乙腈，梯度洗脱如下表；柱温30℃，进样体积2μL；

时间/min	流动相A％	流动相B％
0→1	75	25
1→4	75→10	25→90
4→9	10	90
9-9.8	10→75	90→25
9.8→13	75	25

；

步骤(4)和步骤(5)超高效液相色谱仪检测的质谱条件为：

ThermosFisher三重四级杆质谱仪，离子化方式采用电喷雾离子化，选择多反应监测离子扫描模式，主要扫描参数：喷雾电压-3000eV，+4000eV，毛细管温度270℃，雾化温度：200℃，鞘气N2压力：20V，辅助气压：5V；正、负离子模式同时检测；放电电流：正极4.0μA，负极4.0μA。

2.根据权利要求1所述的具有治疗急慢性肾盂肾炎和前列腺增生功效的中药复方的质量检测方法，其特征在于，步骤(4)的回归方程如下表：