[发明专利]一种在共刺激结构域上携带重复活化基序的嵌合抗原受体T细胞

说明书

本发明涉及一种嵌合抗原受体融合蛋白，其从N端到C端包含：(i)具有抗肿瘤抗原活性的单链可变区片段(scFv)，(ii)跨膜结构域，(iii)至少一个共刺激结构域，其具有一个或多个连续重复至少一次的结合基序，和(iv)激活域。优选的共刺激结构域是CD28、4‑1BB、ICOS‑1、CD27、OX‑40、GITR或DAP10。

技术领域

本发明涉及肿瘤的过继免疫基因治疗领域，具体地涉及一种编码嵌合抗原受体的核酸以及表达嵌合抗原受体的细胞。本发明特别涉及在共刺激结构域上携带重复活化基序的嵌合抗原受体T细胞。

背景技术

免疫治疗是一种非常有前途的治疗癌症的方法。T细胞或T淋巴细胞是免疫系统有效的武器，它们能够持续性地帮我们区分正常细胞和外来抗原或非正常细胞，如癌症或被感染的细胞。基因修饰的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)是设计肿瘤特异性T细胞的常见方案。将靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞输入患者(称为过继细胞转移或ACT)，这代表了一种有效的免疫治疗方法。与化疗或抗体技术相比，CAR-T技术的优点在于重编程的T细胞可以增殖并在患者体内持续存在(“活的药物”)。

CAR(嵌合抗原受体)通常是由一个单克隆抗体衍生的单链可变区片段 (scFv)通过铰链和跨膜结构域连接到可变数目的胞内信号结构域：单个细胞活化的CD3-ζ结构域；以及和CD3-ζ结构域相连的CD28，CD137(4-1BB)或其他共刺激域(也可用CD27信号结构域代替CD28或CD137结构域，图1)。

CAR的发展从第一代(没有共刺激域)到第二代(具有一个共刺激域)到第三代CAR(具有多个共刺激域)。生成的具有多个共刺激域的CAR(即所谓的第三代CAR)会产生增加的细胞溶解活性，并显着改善CAR-T细胞的持续性，表现出增强的抗肿瘤活性。

然而，目前嵌合抗原受体的研究还有很多不足，还存在复发率高、安全性低等问题。因此，本领域迫切需要开发特异性好、疗效稳定、副作用小的嵌合抗原受体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在共刺激结构域上携带重复活化基序的嵌合抗原受体T细胞。

在本发明的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白从N-末端到C-末端包含：

(i)具有抗肿瘤抗原活性的单链可变片段(scFv)

(ii)跨膜结构域，

(iii)至少一个共刺激结构域，其具有一个或多个连续重复至少一次的结合基序，和

(iv)激活域。

在另一优选例中，所述的肿瘤抗原选自下组：间皮素、VEGFR-2、CD19、CD20、 CD30、CD22、CD25、CD28、CD30、CD33、CD52、CD56、CD80、CD81、CD86、CD123、 CD171、CD276、B7H4、CD133、EGFR、GPC3、PMSA、CD3、CEACAM6、c-Met、EGFRvIII、 ErbB2/HER-2、ErbB3/HER3、ErbB4/HER-4、EphA2、IGF1R、GD2、O-acetyl GD2、 O-acetyl GD3、GHRHR、GHR、FLT1、KDR、FLT4、CD44v6、CD151、CA125、CEA、CTLA-4、 GITR、BTLA、TGFBR2、TGFBR1、IL6R、gpl30、LewisA、Lewis Y、TNFR1、TNFR2、 PD1、PD-L1、PD-L2、HVEM、MAGE-A、NY-ESO-1、PSMA、RANK、RORl、TNFRSF4、CD40、 CD137、TWEAK-R、LTPR、LIFRP、LRP5、MUC1、TCRa、TCRp、TLR7、TLR9、PTCH1、WT-1、Robol,a、Frizzled、OX40、CD79b、和Notch-1-4。

在另一优选例中，所述的肿瘤抗原是间皮素。