[发明专利]UHPLC-QQQ-MS/MS同时测定酸枣仁水煎液中6种化学成分含量的方法

说明书

本发明涉及一种采用UHPLC‑QQQ‑MS/MS技术同时测定酸枣仁水煎液中6种化学成分含量的方法，属于中药成分分析领域。本发明所建立同时测定酸枣仁水煎液中6种化学成分含量的分析方法专属性强、快速、灵敏且准确可靠，在完成含量测定的同时能够准确给出化合物质量数信息以达到成分鉴定的效果，该方法可为酸枣仁临床应用与质量控制提供技术支持。

技术领域

本发明涉及一种采用UHPLC-QQQ-MS/MS技术同时测定酸枣仁水煎液中6种化学成分含量的方法，属于中药成分分析领域。

背景技术

酸枣仁作为中医临床上常用的养心安神药，来源于鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子。目前虽有学者已对酸枣仁中化学成分的含量测定进行了研究，但鉴于酸枣仁中含有黄酮类、皂苷类、生物碱类及三萜类等众多成分，且受到传统检测技术HPLC-DAD的检测器性能限制，无法同时快速、准确、灵敏地对酸枣仁中多种类别的化学成分进行含量测定。此外，由于已有的研究多集中于采用有机溶剂作为提取溶剂，这与酸枣仁临床应用模式存在较大差别，研究结果可以为临床应用提供的参考价值有限。

发明内容

为了解决上述存在的问题，本发明采用UHPLC-QQQ-MS/MS技术，建立一种针对酸枣仁水煎液中6种不同类别化学成分同时含量测定的方法，这6种化学成分在结构上涵盖了黄酮类、皂苷类及三萜类，这使得所建立的含量测定方法能够全面、准确、深入地控制酸枣仁的质量。

发明采用如下技术方案：

1.供试品溶液的制备：

按照酸枣仁临床应用经验，精密称取酸枣仁10g，加10倍水于煎药锅中，浸泡30min，武火煮沸后，保持微沸状态煎煮1h，用4层纱布滤出药液；药渣再加8倍水于煎药锅中，用武火煮沸后，保持微沸状态煎煮1h，用4层纱布滤出药液，合并两次煎煮液，加水适量定容至200ml，得酸枣仁水煎液样品。

精密移取酸枣仁水煎液样品0.2ml置5ml量瓶中，加入甲醇定容至5ml，超声10min，放冷，取上层溶液适量，12000r/min离心10min，吸取上清液作为供试品溶液；

2.混合对照品溶液的配制：

分别精密称取斯皮诺素、6”’-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、山茶苷B、白桦脂酸对照品适量，加入甲醇溶解并稀释，摇匀，得到浓度分别为6.312μg/ml、5.885μg/ml、0.991μg/ml、0.668μg/ml、0.640μg/ml、4.504μg/ml的混合对照品溶液；

3.测定法：

采用UHPLC-QQQ-MS/MS法测定混合对照品及供试品溶液中6种化学成分的浓度。

色谱条件：色谱柱为Agilent C₁₈(2.1mm×100mm,1.8μm)反相色谱柱，A(水)-B(乙腈)作为流动相进行梯度洗脱，洗脱程序为：0-1.2min，乙腈的体积分数从5％线性增加至31％，1.2-2.5min，乙腈的体积分数从31％线性增加至95％，2.5-4.5min，乙腈的体积分数从95％线性增加至100％，4.5-5min，乙腈的体积分数保持在100％。流速：0.3ml/min；柱温40℃，进样量：1μl。