[发明专利]一种羊乳清蛋白免疫调节肽、其制备方法及其应用

说明书

本发明提供一种羊乳蛋白免疫调节肽，其包含Thr‑Gly‑Pro‑Ile‑Pro‑Asn‑Ser‑Leu、Arg‑Phe‑Phe‑Asp‑Asp‑Lys‑Ile‑Ala以及Ala‑Pro‑Glu‑Pro‑Glu‑Val‑Phe中的至少一条肽序列。此种羊乳蛋白免疫调节肽从羊乳清蛋白中的获得，原料易得；此种羊乳蛋白免疫调节肽对脾淋巴细胞增殖活性具有非常明显的促进作用，且呈现出一定的剂量依赖效应，具有免疫调节作用。本发明还公开一种上述羊乳蛋白免疫调节肽的制备方法，步骤精简；采用两种蛋白酶(胃蛋白酶和胰蛋白酶)的结合对羊乳清蛋白进行水解，有利于活性肽段更好地释放；采用凝胶色谱柱和高效液相色谱对羊乳蛋白水解物进行分离纯化，产品纯度更高。本发明还提高一种上述羊乳蛋白免疫调节肽的应用，用于制备具有免疫调节活性的食品或保健食品，应用前景广。

技术领域

本发明涉及食品技术领域，特别地，涉及一种羊乳清蛋白免疫调节肽、其制备方法及其应用。

背景技术

目前，随着社会的发展，环境污染、社会压力、人口老龄化等问题日益严重。在这些因素的影响下，机体就会不可避免地出现免疫力下降的现象，从而引发一系列的健康问题。近年来，乳源免疫活性肽备受关注。乳源免疫活性肽是利用蛋白酶水解乳蛋白分离得到的短肽，是继吗啡肽之后在乳蛋白中发现的第二类生物活性肽。在之前的报道中，已从牛乳中分离得到多条免疫调节肽序列，如来源于牛乳αs1-酪蛋白的TTMPLY，RYLGYLE，RYLGYL，FFVAPFPEVFGK；来源于牛乳β-酪蛋白的YQQPVLGPVRGPFPIIV，PGPIPN，YPFPGPIPNSL，APYPQR；来源于牛乳κ-酪蛋白的FFSDK，YG。

羊乳蛋白富含多种生物活性序列，研究表明，从羊乳蛋白中分离得到的肽段具有抑菌降血压、抗氧化、抑制DPP-4等多种生物活性。目前，羊乳蛋白肽的制备及应用得到了广泛的研究。如李志成等在中国专利201410247225.7中公布了一种山羊乳酪蛋白源抗菌肽的制备方法，并测定了所得抗菌肽的一级结构和二级结构；陈合等在中国专利201511024060.8中公布了一种抗氧化肽羊乳饮料的制备方法；陈合等在中国专利201310132351.3中采用不同种类的蛋白酶水解羊乳酪蛋白，得到了ACE抑制肽。但是关于羊乳源的免疫调节肽序列却少有报道。

因此，开发一种免疫调节肽、其制备方法以及其应用具有重要意义。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种羊乳蛋白免疫调节肽，其包含Thr-Gly-Pro-Ile-Pro-Asn-Ser-Leu(TGPIPNSL，详序列表SEQ ID NO.1)、Arg-Phe-Phe-Asp-Asp-Lys-Ile-Ala(RFFDDKIA，详序列表SEQ ID NO.2)以及Ala-Pro-Glu-Pro-Glu-Val-Phe(APEPEVF，详序列表SEQ ID NO.3)中的至少一条肽序列。此种羊乳蛋白免疫调节肽从羊乳清蛋白中的获得，原料易得；此种羊乳蛋白免疫调节肽对脾淋巴细胞增殖活性具有非常明显的促进作用，且呈现出一定的剂量依赖效应，具有免疫调节作用。

本发明还提供一种上述羊乳蛋白免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：

第一步、将羊乳清蛋白加水溶解后，调节pH值至1.5-4.0，加入胃蛋白酶进行水解反应，得到水解反应体系；

第二步、保持水解反应体系的温度不变，调整水解反应体系的pH值至6.0-8.0，加入胰蛋白酶，继续水解1-2h；升高温度继续水解得到羊乳蛋白水解液；

第三步、将羊乳蛋白水解液冷却后离心取上清，收集滤过液，冻干，得到羊乳蛋白水解物粉末；

第四步、采用凝胶色谱柱和高效液相色谱对羊乳蛋白水解物进行分离纯化，得到羊乳蛋白免疫调节肽。