[发明专利]一种嗜热杜邦菌α-淀粉酶的高效制备及其应用

权利要求书

1.一种蛋白质，来源于嗜热杜邦菌(Thermomyces dupontii)L18，是以下1)或2)的蛋白质：

1)序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2)序列表中序列2自氨基酸第19至494位所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.如权利要求1所述蛋白质的编码基因，其特征在于：为以下1)或2)或3)所述的DNA分子：

1)序列表中序列1所示的DNA分子；

2)序列表中序列1的第55至1485位所示的DNA分子；

3)与1)或2)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。

3.含有权利要求2所述编码基因的重组载体、表达盒或重组菌，其特征在于：

所述重组载体为在载体pPIC9K的多克隆位点插入序列表中序列1所示的核苷酸序列得到的重组质粒pPIC9K-TdAmyA；

所述重组菌是通过将所述重组载体导入酵母得到的重组毕赤酵母；所述酵母为巴斯德毕赤酵母GS115。

4.如权利要求1所述蛋白质的生产方法，其特征在于：所述方法是将权利要求3所述重组菌进行发酵培养，得到所述的蛋白质；

所述发酵培养依次经过如下步骤：

1)种子液培养：将所述重组菌接种到150mL BMGY培养基中，在30℃、pH为5.0、溶氧大于20％、200rpm条件下振荡过夜培养至OD600为2-6，得到种子液；

2)基础培养：将步骤1)的种子液接种于含有1.5L基本培养基BSM的5L发酵罐中培养，所述培养温度为30℃，pH为4.0，转速600rpm，待甘油消耗完全，进行甘油流加培养；

3)甘油流加培养：流加质量浓度为50％的甘油，温度为30℃，pH为5.0，通过调整流加速度保持溶氧在20％-70％，流加时间4-6h；待菌体湿重达到180-220g/L，停止流加甘油；

4)甲醇诱导培养：停止流加甘油后，饥饿半小时，流加100％甲醇诱导，转速800rpm，培养温度为30℃，pH为6.0，溶氧20％-70％；

其中步骤1)中，所述BMGY培养基的溶剂是水，溶质是如下终浓度物质：质量百分浓度为1％的酵母提取物，质量百分浓度为2％的蛋白胨，100mM pH 6.0磷酸缓冲液，质量百分浓度为1.34％的YNB，质量百分浓度4×10^-5％生物素和体积百分比1％的甘油；

步骤3)中，所述甘油是溶于水中而形成的500g/L的甘油水溶液；所述甘油加进培养基的速度为30mL/h/1L起始发酵液；

步骤4)中，所述甲醇的流加速度为6mL/h/1L起始发酵液。

5.如权利要求1所述的蛋白质在麦芽糖浆生产中的应用。