[发明专利]不同体积数字PCR定量分析方法在审
| 申请号： | 201810070368.3 | 申请日： | 2018-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN110066856A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 盛广济 | 申请（专利权）人： | 思纳福（北京）医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京华进京联知识产权代理有限公司 11606 | 代理人： | 赵永辉 |
| 地址： | 100094 北京市海淀区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 数字PCR 定量分析 核酸扩增反应 置信区间 标准差 微液滴 检测 个数量级 耗材成本 起始拷贝 核酸 获知 | ||
1.一种不同体积数字PCR的定量分析方法，其特征在于，包括：
S4310：获取所有微液滴体积v1，v2，...vm，所述体积为v1，v2，...vm依次对应的微液滴的数目n1，n2，…，nm，以及所述体积为v1，v2，...vm依次对应的微液滴核酸扩增后的阴性微液滴数目b1，b2，…，bm；
S4320：根据所有微液滴核酸扩增后的相关参数v1、v2，...vm，n1，n2，…，nm，b1，b2，…，bm，构建关于待测核酸扩增反应液浓度c的联合二项分布函数f(c)；
S4330：根据联合二项分布函数f(c)，求使得所述联合二项分布函数f(c)取极值时c的值；
S4340：将所述联合二项分布函数f(c)转化为关于ln(c)的联合二项分布函数F(Λ)，获得关于ln(c)的标准差以及置信区间；
S4350：根据ln(c)的标准差以及置信区间，获取所述待测核酸扩增反应液浓度c的标准差以及置信区间。
2.如权利要求1所述的不同体积数字PCR的定量分析方法，其特征在于，所述S4310包括：
S4311：将含有目标核酸的样品溶液微滴化，获得多个不同体积v1，v2，...vm的微液滴，所述微液滴体积为v1，v2，...vm依次对应的微液滴的数目n1，n2，…，nm；
S4313：将所有微液滴进行核酸扩增，并拍照检测，获得所述所有微液滴的荧光图像；
S4315：根据所述所有微液滴的荧光图像，获取所述所有微液滴的体积为v1，v2，...vm依次对应的核酸扩增后的阴性微液滴数目b1，b2，…，bm。
3.如权利要求1所述的不同体积数字PCR的定量分析方法，其特征在于，所述S4310还包括：
S4312：将含有目标核酸的样品溶液微滴化，形成多个微液滴；
S4314：将所述多个微液滴进行核酸扩增，并拍照检测，获得所有微液滴核酸扩增后的荧光图像；
S4316：根据所述荧光图像，获取所述所有微液滴核酸扩增后的体积，所述体积分别为v1，v2，...vm，所述体积分别为v1，v2，...vm依次对应的核酸扩增后的微液滴的数目n1，n2，…，nm，以及所述体积为v1，v2，...vm依次对应的核酸扩增后的阴性微液滴数目b1，b2，…，bm。
4.如权利要求1所述的不同体积数字PCR的定量分析方法，其特征在于，所述S4320构建关于待测核酸扩增反应液浓度c的联合二项分布函数f(c)为：
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