[发明专利]一种冷冻保存人胎盘羊膜和绒毛膜的保护液及其制备方法和使用方法

权利要求书

1.一种冷冻保存人胎盘羊膜和绒毛膜的保护液，其特征在于，每100ml保护液主要由以下各成分组成：

甘油1-10g、异丙醇5-15g、葡萄糖5-15g、二甲基亚砜1-10g、谷胱甘肽0.2-2g、辅酶Q100.5-2g、氨基酸混合物1-5g、ATP 0.1-1g，余量为去离子水。

2.如权利要求1所述的保护液，其特征在于，所述氨基酸混合物包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺。

3.如权利要求2所述的保护液，其特征在于，所述氨基酸混合物的精氨酸、赖氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺的重量比例为2:1:2:2:3。

4.如权利要求1所述的保护液，其特征在于，每100ml保护液主要由以下各成分组成：

甘油5g、异丙醇10g、葡萄糖10g、二甲基亚砜5g、谷胱甘肽1g、辅酶Q10 1g、氨基酸混合物3g、ATP 0.5g，余量为去离子水。

5.如权利要求1-4任一所述的保护液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S11，取一半目标体积的去离子水，加入葡萄糖，溶解后，加入甘油和异丙醇，搅拌均匀，121℃湿热灭菌，得到基质A；

S12，谷胱甘肽、辅酶Q10、氨基酸混合物和ATP用十分之一目标体积的去离子水溶解，搅拌均匀，过滤灭菌，得到基质B；

S13，无菌条件下，基质B与基质A混合，用无菌的去离子水定容至目标体积，得到保护液。

6.如权利要求1-4任一所述的保护液的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

S21，母体无HIV、HBV的自然生产或剖腹产的人胎盘，用有齿镊轻轻的分离开羊膜和绒毛膜，洗尽血液，剔除血管，并剪成1.0～2.0mm3小块，用无菌生理盐水冲洗羊膜和绒毛膜3次；

S22，保护液预冷到-20℃；

S22，羊膜和绒毛膜转移到冷冻管中，加入预冷的保护液至液面没过羊膜和绒毛膜2-3cm，冷冻管的使用高度不超过1/2；

S23，10min后，冷冻管以5℃/min的速度快速冷冻至-100℃；

S24，转移至液氮罐中超低温保存。

7.如权利要求6所述的保护液的使用方法，其特征在于，还包括解冻步骤：

S241，从液氮罐中中取出冷冻管，加入预冷的保护液至冷冻管满容量，倒置冷冻管；

S242，5-60min后，摇晃1-3min，冷冻管正过来，转移至30℃恒温水浴解冻；

S243，用无菌生理盐水冲洗羊膜和绒毛膜3次。

8.如权利要求2所述的保护液的使用方法，其特征在于，S242中30min后，摇晃1-3min，转移至30℃恒温水浴解冻。

9.如权利要求1-4任一所述的保护液在制备冷冻保存人胎盘羊膜和绒毛膜的保护液中的应用。