[发明专利]一种含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液

说明书

本发明涉及一种含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，将胎盘间充质干细胞进行原代和传代培养后，收集培养液，采用适宜的提纯工艺对培养液进行分离提纯处理，得到的干细胞提取物成分安全，有效成分含量高，对皮肤的刺激性低，具有修复、消炎等功能；另外得到的干细胞提取物稳定性好。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，特别涉及一种含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液。

背景技术

干细胞培养液中含有大量的生物活性物质，现有技术中，有将干细胞培养液应用于美容行业，长期使用含有干细胞培养液的化妆品，具有美白、去皱纹、改善面色、紫外损伤修复等功能。但现有应用于美容行业的干细胞培养液成分极其复杂，对皮肤刺激性大，安全性低；且活性成分较多，因此稳定性很差，多以冻干粉的形式保存，待使用时进行复溶使用，操作繁琐，成本高。

另一方面，为了促进细胞增值，大量分泌生物活性物质的培养基多数为血清培养基，其中的部分成分具有较高使用风险；而成分相对简单的无血清培养基不利于干细胞的增长和生物活性物质的释放，导致得到的培养液活性成分含量极低，美容效果差，使用量大导致副作用明显的问题。

发明内容

本发明的特征在于在前人研究的基础上，提供了一种有效成分含量高，纯度高，风险低，对皮肤刺激性小的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，具体技术方案如下：

一种含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，包括重量份数比为3-7:35-50的胎盘干细胞提取物和稀释溶液，所述胎盘干细胞提取物由如下方法制备而成：

1)无菌采集胎盘组织，剪成2-3mm³的小块胎盘组织；

2)蛋白酶降解组织，过筛，分离得到单细胞；

3)将单细胞按照2×10³个/ml的密度接种于原代无血清培养液中，培养第一天换全部培养液，然后继续培养，每隔2-3天更换半量培养液，代细胞融合至85-90％时，收获原代间充质干细胞，同时收集最后一天经过细胞培养的培养液，得到原代培养液；

4)将收获的原代混合细胞按照3×10⁴个/ml的密度接种于传代无血清培养液中，传代至第三代，每代的经过培养的培养液均进行收集并合并，得到传代培养液；

5)将收集到的原代培养液和传代培养液进行混合得混合液，向混合液中加入350ng/ml亮肽素，然后离心取上清，得到粗提液；

6)将得到的粗提液采用羟丙基葡聚糖凝胶柱提纯，洗脱程序为：纯水充柱3min,然后设置在20-25min内将纯水与甲醇的比例由100:0升至50:50；纯水与甲醇的比例在50:50条件下保持10-15min，收集第5-30min的洗脱液；低温浓缩至溶液体积为原体积的0.005-0.01倍，得到所述胎盘干细胞提取物。

优选地，所述步骤6)中的柱层析流速为4-8mL/min。其中稀释溶液可以为任意与胎盘间充质干细胞向适配的溶液。

将胎盘间充质干细胞进行原代和传代培养后，收集培养液，采用适宜的提纯工艺对培养液进行分离提纯处理，得到的干细胞提取物成分安全，有效成分含量高，对皮肤的刺激性低，具有修复、消炎等功能；另外得到的干细胞提取物稳定性好。

进一步地，所述离心的具体步骤如下：按照10000-12000r/min和4000-5000r/min的速度进行交替离心4-6，每次离心时间7-10min,收集第一层和第二层悬液，得到粗提液。

进一步地，所述原代无血清培养液以OPTI-MEM培养液为基础，还包括如下浓度的组分：8-15ug/mL L-谷氨酰胺、15-30ug/mL腐胺二盐酸盐和20-35ug/mL缬氨酸。