[发明专利]一种含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液

权利要求书

1.一种含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，包括重量份数比为3-7:35-50的胎盘干细胞提取物和稀释溶液，所述胎盘干细胞提取物由如下方法制备而成：

1)无菌采集胎盘组织，剪成2-3mm³的小块胎盘组织；

2)蛋白酶降解组织，过筛，分离得到单细胞；

3)将单细胞按照2×10³个/ml的密度接种于原代无血清培养液中，培养第一天换全部培养液，然后继续培养，每隔2-3天更换半量培养液，代细胞融合至85-90％时，收获原代间充质干细胞，同时收集最后一天经过细胞培养的培养液，得到原代培养液；

4)将收获的原代混合细胞按照3×10⁴个/ml的密度接种于传代无血清培养液中，传代至第三代，每代的经过培养的培养液均进行收集并合并，得到传代培养液；

5)将收集到的原代培养液和传代培养液进行混合得混合液，向混合液中加入350ng/ml亮肽素，然后离心取上清，得到粗提液；

6)将得到的粗提液采用羟丙基葡聚糖凝胶柱提纯，洗脱程序为：纯水充柱3min,然后设置在20-25min内将纯水与甲醇的比例由100:0升至50:50；纯水与甲醇的比例在50:50条件下保持10-15min，收集第5-30min的洗脱液；低温浓缩至溶液体积为原体积的0.005-0.01倍，得到所述胎盘干细胞提取物。

2.如权利要求1所述含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述步骤6)中的柱层析流速为4-8mL/min。

3.如权利要求1所述的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，离心的具体步骤如下：按照10000-12000r/min和4000-5000r/min的速度进行交替离心4-6次，每次离心时间7-10min,收集第一层和第二层悬液，得到粗提液。

4.如权利要求1所述的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述原代无血清培养液以OPTI-MEM培养液为基础，还包括如下浓度的组分：8-15ug/mL L-谷氨酰胺、15-30ug/mL腐胺二盐酸盐和20-35ug/mL缬氨酸。

5.如权利要求4所述的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述传代无血清培养液以OPTI-MEM培养液为基础，还包括如下浓度的组分：15-25ug/mL L-谷氨酰胺、20-30ug/mL氯化胆碱和7-12ug/mL色氨酸。

6.如权利要求1-5任一所述含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述皮肤黏膜洗液还包括重量份数为5-8的秋葵提取物。

7.如权利要求1所述的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述稀释溶液为质量分数为2％的枸缘酸钠水溶液。

8.如权利要求6所述的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述秋葵提取物的制备方法如下：取新鲜秋葵，切片后加入与新鲜秋葵等重量的去离子水打浆，得到的浆液放置于沸水蒸汽中蒸3-5min，然后向浆液中加入新鲜秋葵2-3倍重量的乙醇，调节PH值为5-5.7，常温搅拌40-60min，过滤后浓缩至无醇，即得所述秋葵提取物。

9.如权利要求8所述的含有胎盘干细胞提取物的皮肤黏膜洗液，其特征在于，所述PH值由枸缘酸调节。