[发明专利]一种检测FLT3-D835基因的试剂盒与应用

权利要求书

1.一种检测FLT3-D835基因的试剂盒，其特征在于：包括：针对EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC设计的正向引物、针对EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC设计的反向引物、PCR反应液Mix、纯水、EcoRV内切核酸酶及内切核酸酶缓冲液；

所述针对EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC设计正向引物的核苷酸序列如SEQ.ID.No1：

5’-CAGGAAACAGCTATGACCAGGAACGTGCTTGTCACCC-3’

所述针对EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC设计反向引物的核苷酸序列如SEQ.ID.No2：

5’-ACGACGGCCAGTGATATCATAGCAGCCTCACATTGCCC-3’；

经EcoRV内切核酸酶识别位点的正向引物SEQ.ID.No1和反向引物SEQ.ID.No2 PCR扩增后的D835扩增产物用于设计酶切反应体系进行酶切反应，酶切产物经处理过程预处理后用于电泳检测；

所述酶切反应体系成分包括D835扩增产物、EcoRV内切核酸酶、内切核酸酶缓冲液以及纯水，将以上4种成分按照一定比例进行配制，将酶切反应体系置于37℃±1℃进行充分的酶切反应；

所述酶切反应体系的总体积为0.015ml，其中，EcoRV内切核酸酶用量为0.0010ml，内切核酸酶缓冲液为0.0010ml，纯水为0.008ml，D835扩增产物0.003ml；

所述处理过程的具体过程为：取出经SEQ.ID.No1和SEQ.ID.No2所示的引物序列扩增后的酶切产物，往反应体系中加入一定量的补充液，然后与上样缓冲液进行1:3的比例混合，使总体系达到0.004ml，经混合物充分振荡混匀，离心后得到预处理液。

2.如权利要求1所述的检测FLT3-D835基因的试剂盒，其特征在于：扩增后的FLT3-D835产物序列均包含EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC。

3.如权利要求1所述的检测FLT3-D835基因的试剂盒，其特征在于：所述针对EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC设计的正向引物的核苷酸序列SEQ.ID.No1，包括一段与人类基因组序列非同源的接头序列；针对EcoRV内切核酸酶识别位点GATATC设计的反向引物的核苷酸序列SEQ.ID.No2，包括一段与人类基因组序列非同源的接头序列和内标序列。