[发明专利]从还原性糖的肼类发色试剂衍生物中再生还原性糖的方法

权利要求书

1.从还原性糖的肼类发色试剂衍生物中再生还原性糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取还原性糖，按照摩尔数不小于10倍还原性糖的量加入肼类发色试剂，所述肼类发色试剂为：苯磺酰肼、对甲苯磺酰肼、苯甲酰肼、苯乙酰肼、吉拉德试剂、苯肼、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙以及其他同时带有肼基和发色基团的化学试剂，然后溶于有机溶剂的弱酸水溶液中，摇匀，加热进行反应，反应结束后浓缩干燥；

（2）将步骤（1）得到的样品加水溶解，然后用有机溶剂萃取，离心，除去有机相，取水相，重复萃取操作数次，除去未反应的肼类发色试剂，最后将所得水相浓缩干燥；

或者，将步骤（1）得到的样品加水溶解，然后过C18柱和/或PGC固相萃取柱进行纯化；

（3）将步骤（2）得到的样品通过色谱法进行分离，收集单个糖类衍生物级分；

（4）将步骤（3）收集的单个糖类衍生物级分干燥，然后溶于弱酸水溶液中，在加热的条件下脱除肼类发色试剂标记物，再生还原性糖链。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述还原性糖包括：以各种方法从生物样品中直接提取的带有还原端醛基的糖、糖缀合物上释放的带有还原端醛基的糖和各种人工合成的带有还原端醛基的糖。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述色谱法包括：HILIC-HPLC、RP-HPLC和PGC-HPLC。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述弱酸水溶液包括：乙酸与水的混合溶液、柠檬酸与水的混合溶液和甲酸与水的混合溶液。