[发明专利]一种组蛋白提取试剂盒及其提取方法

说明书

本发明属于蛋白质生物技术领域，具体涉及一种组蛋白提取试剂盒及其提取方法。该组蛋白提取试剂盒包括：细胞裂解液、去污剂、0.4M H₂SO₄溶液以及组蛋白沉淀液；细胞裂解液由如下组分组成：10mM TrisCl；150mM NaCl；1.5mM MgCl₂和1mM PMSF。上述试剂盒可以有效提取分离细胞中的组蛋白各个组成亚型，特别是普通方法难以分离的H2A和H2B以及H3这3种亚型组蛋白。该试剂盒通过温和裂解条件和适宜酸浓度大大提高了组蛋白的提取水平，作为检测组蛋白翻译后修饰变化的理想实验方案，可以为组蛋白的生物学功能研究加强巩固基础。

技术领域

本发明属于蛋白质生物技术领域，具体涉及一种组蛋白提取试剂盒及其提取方法。

背景技术

组蛋白是一种重要的染色质的主要蛋白组成部分，是脱氧核糖核酸折叠成功能结构的核心线轴，在基因调控中发挥着极其重要的作用。组蛋白的核心组成包括5个亚型(H1,H2A,H2B,H3,H4)，其从核小体里伸出来长尾巴经过各种遗传后修饰(磷酸化、泛素化、甲基化、乙酰化等)，可以改变DNA与核蛋白之间的相互作用，从而参与多种生物过程(DNA损伤修复、染色质有丝分裂等)。所以组蛋白水平的研究是表观遗传调控作用的重要调控机制之一。

1884年，Albrecht首次从鸟类红细胞中成功算提取得“组蛋白”到并定义；1967年，Johns通过高盐浓度研究得到了组蛋白；越来越多的技术发展(反向高效液相色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳等)促进了组蛋白的深入研究。但是，尽管所有的方法可以将组蛋白从细胞中提取出来，仍旧很难完全分离组蛋白各个组成亚型，尤其是分子量非常接近的H2A,H2B,H3三种亚型，给靶向研究表观遗传学带来了很大的困扰。

发明内容

本发明实施例旨在解决利用现有的组蛋白提取试剂盒中的溶液进行提取得到的组蛋白中各个组成亚型不能完全分离的技术问题。

为解决上述问题，本发明实施例提供以下技术方案：

在第一方面，本发明实施例提供一种组蛋白提取试剂盒，包括：细胞裂解液、去污剂、0.4M H₂SO₄溶液以及组蛋白沉淀液；

所述细胞裂解液由如下组分组成：

10mM TrisCl，pH值为8.0；

150mM NaCl；

1.5mM MgCl₂；

1mM PMSF。

可选地，所述去污剂为：0.5％的NP-40。

可选地，所述去污剂为0.1％的NP-40和0.1％的Tween20的混合液。

可选地，所述组蛋白沉淀液为三氯乙酸。

可选地，所述组蛋白沉淀液为5.4％高氯酸。

可选地，所述组蛋白提取试剂盒还包括：用于洗涤沉淀的冰丙酮。

在第二方面，本发明实施例还提供一种上述组蛋白提取试剂盒的组蛋白提取方法，包括：使用所述细胞裂解液和所述去污剂重悬细胞，进行细胞裂解并获得细胞核沉淀；

向所述细胞核沉淀加入所述0.4M H₂SO₄溶液进行重悬；

对所述重悬后的细胞核沉淀进行离心，分离获得上清；

向所述上清滴加所述组蛋白沉淀液；

对所述滴加了所述组蛋白沉淀液的上清进行离心，分离获得组蛋白沉淀。

可选地，所述方法还包括：使用冰丙醇温和洗涤所述组蛋白沉淀两次。