[发明专利]一种磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒及应用

说明书

一种磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒及应用，属于分子生物学技术领域。该试剂盒包括以下六种组分：磁珠悬液A、缓冲液B、缓冲液C、缓冲液D、缓冲液E和洗脱液。该试剂盒提取方法包括以下四个步骤：细菌裂解、磁珠吸附、洗涤、洗脱。本发明试剂盒采用单分散、超顺磁性硅羟基纳米磁珠，配合独特的缓冲液系统，提取出来的细菌基因组DNA浓度大、纯度高、完整性好。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种DNA提取试剂盒。

背景技术

基因组DNA的提取是分了生物学研究的一个重要环节，是进行几乎所有核酸检测的基础。传统的细菌基因组DNA提取方法有酚—氯仿抽提法、盐析法和离心柱法等。这些方法均存在一些缺点，例如：酚—氯仿抽提法要使用到酚和氯仿等有毒物质，对人体有害，且容易造成环境污染；盐析法提取的DNA纯度低。硅胶膜吸附柱法提取的DNA浓度低。

传统细菌基因组DNA提取方法同时提取过程需要反复换管、离心、分液，步骤繁琐，提取工作效率低下，并且会造成样本的丢失与污染。此外。传统的方法实现自动化困难、单位时间通量低、既费时又繁琐，远远不适用于核酸自动化检测。近年来，基于纳米材料的基因组DNA分离技术得到了快速发展，而纳米磁珠由于具有分散性好、易于功能化、易于自动化的优点使之成为非常合适的基因组DNA制备载体。应用表面修饰了功能基团的纳米磁珠和合适的缓冲液系统，能够快速、高效地从细菌中提取基因组DNA。具有自动化升级的潜力，使得核酸提取的大规模集成化，均一化成为可能。

由于细菌中存在大量的蛋白质和RNA，现有的磁珠法提取的细菌基因组DNA由于没有去除蛋白质和RNA等杂质的步骤，提取到的基因组DNA得率低、纯度低。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒，利用该试剂盒提取的细菌基因组DNA片段完整，纯度高，无蛋白质和RNA污染，并且得率高。

为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案。

本发明所述的一种磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒，包括磁珠悬液A、缓冲液B、缓冲液C、缓冲液D、缓冲液E、洗脱液六种组分。

所述磁珠悬液A中使用的磁珠为单分散、超顺磁性硅羟基纳米磁珠，磁珠粒径300-500nm，浓度100mg/mL，磁珠悬浮在20%的乙醇中。

所述缓冲液B终浓度组成为：2-5mol/L盐酸胍、1-2%月桂酰肌氨酸钠、200-500µg/mL核糖核酸酶A（RNase A）、0.05-0.1mol/L柠檬酸钠，溶剂为无菌去离子水，缓冲液B pH为6.5-8.0。核糖核酸酶A可以快速有效的降解体系中的RNA，去除RNA污染，同时增加磁珠对DNA的吸附量。

所述缓冲液C终浓度组成为：1-2mol/L异硫氰酸胍、60-80%异丙醇、1-5%聚乙二醇、0.02-0.05mol/L柠檬酸钠，溶剂为无菌去离子水，缓冲液C pH为5.5-7.5。缓冲液C为清洗液，其中的异硫氰酸胍能够使体系中的蛋白质迅速变性而与DNA分离，达到清除蛋白质的目的。

所述缓冲液D终浓度组成为：1-2mol/L醋酸钠、5-8%聚乙二醇，溶剂为无菌去离子水，缓冲液D pH为5.0-6.0。

所述缓冲液E终浓度组成为：0.05-0.1mol/L氯化钠、60-80%乙醇、10mmol/L三羟甲基氨基甲烷，溶剂为无菌去离子水，缓冲液D pH为7.0-7.5。

所述洗脱液为：无菌去离子水或10mmol/L三羟甲基氨基甲烷，洗脱液pH为7.0-8.0。

本发明所述的试剂盒提取细菌基因组DNA包括细菌裂解、磁珠吸附、洗涤、洗脱步骤，具体如下。

步骤一，向离心管中加入100-500μL细菌培养液，然后加入初始菌液相同体积的缓冲液B，混匀，裂解15分钟。