[发明专利]一种磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒及应用

权利要求书

1.一种磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒，其特征是包括磁珠悬液A、缓冲液B、缓冲液C、缓冲液D、缓冲液E、洗脱液六种组分；

所述磁珠悬液A中使用的磁珠为单分散、超顺磁性硅羟基纳米磁珠，磁珠粒径300-500nm，浓度100mg/mL，磁珠悬浮在20%的乙醇中；

所述缓冲液B终浓度组成为：2-5mol/L盐酸胍、1-2%月桂酰肌氨酸钠、200-500µg/mL核糖核酸酶A、0.05-0.1mol/L柠檬酸钠，溶剂为无菌去离子水，缓冲液B pH为6.5-8.0；

所述缓冲液C终浓度组成为：1-2mol/L异硫氰酸胍、60-80%异丙醇、1-5%聚乙二醇、0.02-0.05mol/L柠檬酸钠，溶剂为无菌去离子水，缓冲液C pH为5.5-7.5；

所述缓冲液D终浓度组成为：1-2mol/L醋酸钠、5-8%聚乙二醇，溶剂为无菌去离子水，缓冲液D pH为5.0-6.0；

所述缓冲液E终浓度组成为：0.05-0.1mol/L氯化钠、60-80%乙醇、10mmol/L三羟甲基氨基甲烷，溶剂为无菌去离子水，缓冲液D pH为7.0-7.5；

所述洗脱液为：无菌去离子水或10mmol/L三羟甲基氨基甲烷，洗脱液pH为7.0-8.0。

2.权利要求1所述的磁珠法细菌基因组DNA提取试剂盒的应用，其特征是按如下步骤：

步骤一，向离心管中加入100-500μL细菌培养液，然后加入初始菌液相同体积的缓冲液B，混匀，裂解15分钟；

步骤二，向离心管中加入10μL 磁珠悬液A和2倍初始菌液体积的缓冲液C，混匀，室温放置3分钟；

步骤三，将离心管置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至孔壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管；

步骤四，加入500μL 缓冲液D，混匀，将离心管置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至管壁上后，吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管；

步骤五，加入500μL 缓冲液E，混匀，将离心管置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至管壁上后，吸弃上清，然后从磁力架上取出离心管；

步骤六，重复步骤五1次；

步骤七，将离心管置于55℃恒温箱中干燥5-7 分钟至离心管内无液体残留；

步骤八，加入50-100μL洗脱液，充分悬浮磁珠5分钟；

步骤九，取出离心管并置于磁力架上15秒，待磁珠完全吸至管壁上后，小心吸取上清至新的离心管，即获得DNA产物。