[发明专利]一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒及方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术中的核酸提取领域，特别是涉及一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒及方法。

背景技术

核酸提取的主要方法包括：(1)有机试剂抽提法、(2)离心柱法、(3)磁珠法,其中：

(1)有机试剂抽提法，即所谓的酚-氯仿提取法。因为使用两种不同的有机溶剂交替抽提更容易将蛋白除去，这种方法提取的DNA纯度高、片段大、效果好，缺点是较为繁琐，提取过程需要使用的有机溶剂毒性较大只能作为实验室自配试剂使用。

(2)离心柱法，在高浓度离液盐存在下，从细胞(包括细菌)或病毒颗粒中释放出来的核酸成分可以结合在二氧化硅上，再通过洗涤、洗脱的步骤获取纯化核酸，该方法在商用核酸提取试剂盒中使用最为广泛，相对于有机试剂抽提法，提取步骤简单，提取过程不使用有机试剂。

(3)磁珠法原理与离心柱法相同，其运用二氧化硅磁珠在外加磁场下将核酸分离，相对于离心柱法，提取核酸纯度更高，易于实现自动化。

石蜡组织的存档代表了珍贵且来源广泛的生物医学研究材料，但由于其在制备过程中甲醛溶液(福尔马林)固定会导致样本中DNA分子会断裂交联，使用有机试剂抽提、离心柱法都会在反复的操作的纯化过程中导致核酸片段损失，回收效率低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对石蜡包埋组织样本提供一种使用安全，操作简便，回收效率高，制造成本较低的核酸释放试剂盒和方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一方面，提供一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒，包括：蛋白酶K溶液、第一核酸释放试剂及第二核酸释放试剂；

所述蛋白酶K溶液包括：蛋白酶K 10-100g/L,Tris(pH7.0-11.0)10-200mM/L,无水氯化钙0.01-5mM/L；

所述第一核酸释放试剂包括：Tris(pH 7.0-11.0)1-1000mM/L，Triton X-100体积比为0.1-2％，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％，EDTA二钠盐0.1-10mM/L；

所述第二核酸释放试剂包括Tris(pH 7.0-8.0)10-200mM/L，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％。

作为本发明进一步地改进，所述蛋白酶K溶液包括：蛋白酶K10-100g/L,Tris(pH 7.0-8.0)10-200mM/L,无水氯化钙0.01-5mM/L；

所述第一核酸释放试剂包括：Tris(pH8.0-10.0)10-200mM/L，Triton X-100体积比为0.1-2％，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％，EDTA二钠盐0.1-10mM/L；

所述第二核酸释放试剂包括Tris(pH 7.0-8.0)10-200mM/L，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％。

进一步地，还包括离心柱；所述离心柱包括分离管和收集管；

所述分离管包括由上至下依次连接的：储存段管口、储存段、过滤段及出口；所述储存段管口连接有分离管管盖；所述过滤段内设置有过滤膜组件；

所述收集管为1.5-2mL离心管，用于套在分离管外侧与储存段外侧紧密结合。

进一步地，所述过滤膜组件的材料采用棉质纤维、硝酸纤维素、醋酸纤维素、聚丙烯、玻璃纤维膜中的一种或一种以上的组合。

进一步地，所述过滤滤膜组件的结构为卷式、平板式、碟管式、中空纤维式或管式。

另一方面，提供一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的方法，利用上述试剂盒进行核酸释放，包括如下步骤：

S1:切取石蜡切片；

S2:将石蜡切片放入离心管中，加入第一核酸释放试剂及蛋白酶K溶液，充分混匀后进行第一次孵育；

S3:再加入第二核酸释放试剂，涡旋混匀后进行第二次孵育,获得裂解产物；

S4:最后将裂解产物经离心柱过滤即可得到目的核酸。

作为本发明进一步地改进，所述S2中，第一次孵育为50-60℃孵育5-60min；所述S3中，第二次孵育为85-95℃孵育2-20min。

进一步地，对每3-7片厚度4-6um的石蜡包埋组织切片，其中：

所述蛋白酶K溶液的加入量为5-50ul；所述第一核酸释放试剂的加入量为50-500ul；第二核酸释放试剂的加入量为50-500ul。

进一步地，具体步骤为：