[发明专利]一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒，其特征在于，包括：蛋白酶K溶液、第一核酸释放试剂及第二核酸释放试剂；

所述蛋白酶K溶液包括：蛋白酶K 10-100g/L,Tris(pH 7.0-11.0)10-200mM/L,无水氯化钙0.01-5mM/L；

所述第一核酸释放试剂包括：Tris(pH 7.0-11.0)1-1000mM/L，Triton X-100体积比为0.1-2％，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％，EDTA二钠盐0.1-10mM/L；

所述第二核酸释放试剂包括Tris(pH 7.0-8.0)10-200mM/L，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％。

2.根据权利要求1所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒，其特征在于:

所述蛋白酶K溶液包括：蛋白酶K 10-100g/L,Tris(pH 7.0-8.0)10-200mM/L,无水氯化钙0.01-5mM/L；

所述第一核酸释放试剂包括：Tris(pH8.0-10.0)10-200mM/L，Triton X-100体积比为0.1-2％，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％，EDTA二钠盐0.1-10mM/L；

所述第二核酸释放试剂包括Tris(pH 7.0-8.0)10-200mM/L，Nonidet P-40或其替代物体积比为0.1-2％。

3.根据权利要求1或2所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒，其特征在于，还包括离心柱；

所述离心柱包括分离管和收集管；

所述分离管包括由上至下依次连接的：储存段管口、储存段、过滤段及出口；所述储存段管口连接有分离管管盖；所述过滤段内设置有过滤膜组件；

所述收集管为1.5-2mL离心管，用于套在分离管外侧与储存段外侧紧密结合。

4.根据权利要求3所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒，其特征在于，所述过滤膜组件的材料采用棉质纤维、硝酸纤维素、醋酸纤维素、聚丙烯、玻璃纤维膜中的一种或一种以上的组合。

5.根据权利要求3所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的试剂盒，其特征在于，所述过滤滤膜组件的结构为卷式、平板式、碟管式、中空纤维式或管式。

6.一种从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的方法，其特征在于，利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒进行核酸释放，包括如下步骤：

S1:切取石蜡切片；

S2:将石蜡切片放入离心管中，加入第一核酸释放试剂及蛋白酶K溶液，充分混匀后进行第一次孵育；

S3:再加入第二核酸释放试剂，涡旋混匀后进行第二次孵育,获得裂解产物；

S4:最后将裂解产物经离心柱过滤即可得到目的核酸。

7.根据权利要求6所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的方法，其特征在于，所述S2中，第一次孵育为50-60℃孵育5-60min；所述S3中，第二次孵育为85-95℃孵育2-20min。

8.根据权利要求6或7所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的方法，其特征在于，对每3-7片厚度4-6um的石蜡包埋组织切片，其中：

所述蛋白酶K溶液的加入量为5-50ul；所述第一核酸释放试剂的加入量为50-500ul；第二核酸释放试剂的加入量为50-500ul。

9.根据权利要求8所述的从石蜡包埋组织切片中快速释放核酸的方法，其特征在于，具体步骤为：

S1:从石蜡包埋组织上切取3-7片5uM的FFPE切片；

S2：将样本切片放入离心管中，加入100ul第一核酸释放试剂，20ul蛋白酶K溶液，充分混匀，56℃孵育10min；

S3：加入100ul第二核酸释放试剂，涡旋混匀，90℃孵育10min；

S4:最后将裂解产物经离心柱过滤即可得到目的核酸。