[发明专利]ABCB1、CYP3A5基因检测引物组、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，提供一种ABCB1、CYP3A5基因检测引物组，用于对含待测位点的核酸片段进行特异性扩增，所述待测位点包括ABCB1基因上的rs1045642位点和CYP3A5基因上的rs776746位点，所述引物组包括rs1045642引物组、rs776746引物。本发明还提供了一种基因检测试剂盒及检测方法。本发明的基因检测引物组能够对含上述待测位点的核酸片段进行特异性扩增，使得对ABCB1、CYP3A5基因突变检测灵敏度高、假阳性率低；本发明采用第二代高通量基因测序技术对待测位点的基因型进行检测，使得检测周期短，通量高。

技术领域

本发明涉及基因工程及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种ABCB1、CYP3A5基因检测引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

紫杉醇是一种三环二萜类化合物，具有独特的抗肿瘤机制，其广泛的抗癌谱和确切的临床疗效已得到人们的重视。后经研究发现紫杉醇是一种微管的特异性稳定剂，可促进微管的装配和保持微管稳定。当细胞与紫杉醇接触后，会在细胞内积累大量的微管，而这些微管的积累将干扰细胞的各种正常功能，特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂。基于上述机制，紫杉醇是目前所研究报道的惟一一种能控制癌细胞生长的植物药。学者们推测紫杉醇的不良反应的产生主要是因为紫杉醇作用于细胞内微管系统，而该系统遍布于体内所有的细胞，故紫杉醇的作用未能特异地靶向癌细胞，而是普遍作用于体内各种细胞。

研究表明人ABCB1基因通过ATP水解提供动力将底物外排至细胞外，可将肿瘤药物逆浓度梯度从胞浆内泵至胞浆外，从而降低化疗药物诱导的细胞凋亡并导致肿瘤细胞耐药。有研究认为，人CYP3A5基因突变是导致其表达水平发生改变的主要调控方式，同时也能影响其代谢酶的活性，最终表现为代谢底物的能力和速率发生不同程度的改变，是导致临床用药出现个人、种族间差异最重要的原因。

已发现的ABCB1基因多态性如ABCB1 C3435T（rs1045642）突变导致细胞外泵能力降低，表现在肿瘤细胞中，则使疗效更好。CYP3A5*3（rs776746）基因型是CYP3A5基因的第3内含子的6986A>G突变产生的，CYP3A5的表达水平及其酶的活性密切相关。CYP3A5*3基因型导致mRNA的剪接发生改变，使翻译提早终止，蛋白质截短，导致CYP3A5酶活性降低甚至消失，是人群中CYP3A5基因最主要的基因多态性。

通过对患者的两种基因进行检测，得到特定位点的基因型，以基因检测结果作为中间结果的信息的方法，不属于疾病的诊断方法；以基因型的检测结果来确定药物的选择，就可以实现个体化用药，避免对免疫抑制剂不良反应。

目前对基因突变和基因多态性的检测，常见有直接测序法、基因芯片杂交法、Taqman荧光探针法、等位基因特异性扩增法（Amplification Refractory MutationSystem Real Time PCR，ARMS-RT PCR）、等位基因特异性扩增法（AmplificationRefractory Mutation System Real Time PCR，ARMS-RT PCR）等。上述方法灵敏度低、假阳性率高、耗时较长，通量小。

因此，需要一种新的检测ABCB1、CYP3A5基因突变的试剂盒及检测方法，使得对ABCB1、CYP3A5基因突变的灵敏度高，假阳性率低，且检测周期短。

发明内容

本发明的目的在于提供一种ABCB1、CYP3A5基因检测引物组、试剂盒及检测方法，旨在解决现有技术中ABCB1、CYP3A5基因检测灵敏度低、假阳性率高、周期长，通量小的技术问题。

本发明提供了一种ABCB1、CYP3A5基因检测引物组，用于对含待测位点的核酸片段进行特异性扩增，所述待测位点包括ABCB1基因上的rs1045642位点和CYP3A5基因上的rs776746位点，所述引物组包括rs1045642引物组、rs776746引物组；