[发明专利]一种芽孢杆菌的发酵方法

说明书

本发明公开了属于微生物发酵技术领域的一种芽孢杆菌的发酵方法。芽孢杆菌经一、二级种子扩大培养后接入发酵培养基中培养，期间通过补料流加碳源和发酵培养基中相对缺乏的限制性氨基酸，经喷雾干燥得到的每克菌粉芽孢杆菌CFU不少于2.3×10¹¹个，芽孢率大于93％，增加了芽孢杆菌的数量和芽孢转化率，显著提高单位产量，并降低单位成本。枯草芽孢杆菌ANSB01G用于玉米赤霉烯酮的降解，48h后体系中玉米赤霉烯酮的降解率可达到92％。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种芽孢杆菌的发酵方法。

背景技术

玉米赤霉烯酮(ZEN)又称F-2毒素，是一类2，4-二羟基苯甲酸的内酯化合物，具有类雌性激素作用，可与子宫内雌激素受体不可逆结合，从而影响动物的生殖生理。玉米赤霉烯酮对畜牧业及人类产生严重的危害，因此，有效控制和解决ZEN对粮食和饲料的污染，对改善动物生产性能和提高人类食品安全有非常重要的意义。科学工作者们对该毒素的解毒去除方法进行了不断研究，总结国内外研究者关于ZEN除毒去毒方法，主要包括物理去毒法、化学去毒法和微生物及生物酶降解法。传统的理化方法对ZEN去毒均不理想，从而限制了在实际生产中的应用。

申请公布号为CN102181376A的发明专利公开了一种同时降解玉米赤霉烯酮和纤维素的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ANSB01G(保藏编号为CGMCC No.4297)。并公开其培养方法为，取活菌浓度为10⁹CFU/ml的枯草芽孢杆菌0.5-2.5ml，接种于50-100ml培养基中，在30-40℃进行摇瓶发酵培养20-30h，转速180-220r/min，pH值7.0-7.4。取枯草芽孢杆菌的发酵液600-800μl，加入500ppb的玉米赤霉烯酮150-200μl，将反应体系的pH值调节为7.0-7.4，在36-38℃反应2-72h，枯草芽孢杆菌ANSB01G对玉米赤霉烯酮的降解率达到83％。

申请公开号为CN104232526A的发明专利公开了一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺，枯草芽孢杆菌ANSB01G活菌制备工艺需要同时兼顾活菌数和玉米赤霉烯酮降解活性，CN104232526A中提供的发酵方法不能满足枯草芽孢杆菌ANSB01G发挥最佳的玉米赤霉烯酮降解特性。

发明内容

本发明为了解决上述存在的技术问题，提出一种芽孢杆菌的发酵方法。具体技术方案如下：

一种芽孢杆菌的发酵方法，包括如下步骤：

(1)一级种子制备：取芽孢杆菌菌种悬浊液接种于一级种子培养基中，然后进行培养；

(2)二级种子制备：将一级种子接种于二级种子培养基中，然后进行培养；

(3)发酵：将二级种子接种于发酵培养基中，然后进行发酵培养；

当发酵至8-10h时流加补料培养基A，发酵至12-17h时流加补料培养基B；

所述补料培养基A包含质量百分比10％-20％的碳源；

所述补料培养基B包含质量百分比5％-10％的碳源和质量百分比1.8％-9.5％发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸。

所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌。

所述一级种子培养基包括的原料为：每1000mL，包括胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化钠3-6g、磷酸氢二钠2.5-4g、七水硫酸镁0.5-1.5g，蒸馏水1000mL，pH为7.0-7.4；

所述二级种子培养基包括的原料按质量百分比为：葡萄糖0.5％-3％，酵母抽提物0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，磷酸氢二钾0.02％-0.05％，氯化钠0.5％-1％，硫酸镁0.02％-0.1％，培养基pH为6.5-7.5；