[发明专利]一种芽孢杆菌的发酵方法

权利要求书

1.一种芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）一级种子制备：取芽孢杆菌菌种悬浊液接种于一级种子培养基中，然后进行培养；

（2）二级种子制备：将一级种子接种于二级种子培养基中，然后进行培养；

（3）发酵：将二级种子接种于发酵培养基中，然后进行发酵培养；

当发酵至8-10h时流加补料培养基A，发酵至12-17h时流加补料培养基B；

所述补料培养基A包含质量百分比10%-20%的碳源；

所述补料培养基B包含质量百分比5%-10%的碳源和质量百分比1.8%-9.5%发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸；

所述补料培养基A和补料培养基B的流加量均为发酵培养基体积的0.1-1.0‰；所述碳源为葡萄糖，所述发酵培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸为赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸和精氨酸；

所述补料培养基A的的原料及用量为：葡萄糖10%-20%，培养基pH为6.5-7.5；

所述补料培养基B的原料及用量为：葡萄糖5%-10%，赖氨酸1.0%-4.0%，苯丙氨酸0.5%-3.0%，蛋氨酸0.2%-1.5%，精氨酸0.1%-1.0%，培养基pH为6.5-7.5；

所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）ANSB01G；所述芽孢杆菌能够降解玉米赤霉烯酮。

2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述一级种子培养基的原料为：胰蛋白胨8-12g、酵母浸膏1.5-3g、葡萄糖1.5-4g、牛肉膏2-5g、氯化钠3-6g、磷酸氢二钠2.5-4g、七水硫酸镁0.5-1.5g，蒸馏水1000mL，pH为7.0-7.4。

3.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述二级种子培养基的原料按质量百分比为：葡萄糖0.5%-3%，酵母抽提物0.5%-3%，蛋白胨0.5%-3%，磷酸氢二钾0.02%-0.05%，氯化钠0.5%-1%，硫酸镁0.02%-0.1%，培养基 pH为6.5-7.5。

4.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的原料按质量百分比为：葡萄糖0.5%-2.5%，豆粕 1.5%-4%，玉米浆1%-5%，酵母粉1%-3%，蛋白胨1%-3%，磷酸氢二钾0.01%-0.05%，硫酸镁0.1%-0.2%，硫酸锰0.002%，培养基pH为6.5-7.5。

5.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述芽孢杆菌菌种悬浊液浓度为1×10¹⁰-2×10¹¹cfu/mL，将芽孢杆菌菌种悬浊液按照体积百分比1%-5%接种于一级种子培养基中；

将含有一级种子的一级种子培养基按照体积百分比1%-5%接种于二级种子培养基中；

将含有二级种子的二级种子培养基按照体积百分比1%-5%接种于发酵培养基中。

6.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，步骤（1）中所述培养条件为：温度37℃-40℃，时间16-24h，转速180-200r/min；

步骤（2）中所述培养条件为：温度30℃-35℃，时间8-10h，转速180-200r/min；

步骤（3）中所述发酵培养条件为：发酵温度为30℃-35℃，时间24-36h，发酵罐罐压为0.02Mpa-0.05Mpa，转速180-200r/min。

7.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基装入量为发酵罐有效容积的50%-70%。