[发明专利]一种提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法

说明书

本发明公开了一种提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法，包括以下步骤：将芽孢杆菌活化；将活化后的菌种依次按照从正常培养基到贫瘠培养基，然后再增加营养物质浓度到正常培养基中培养的顺序进行传代培养，培养基根据浓度设置3个以上，连续传代3代以上。本发明提供的提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法，很大程度上缩短了培养驯化时间，操作简单，按照本发明的方法，可以使芽孢杆菌的产芽孢率提高到96％。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体的是涉及一种提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法。

背景技术

随着微生态制剂成为饲料添加剂研究的热点，益生菌制剂在动物饲养中的优势逐步显现。但是大多数益生菌存在抗逆性差，不耐热的缺点，给制剂的保藏、运输都带来了较大困难。芽孢杆菌是在自然界广泛存在的一种好氧的产芽孢杆菌，芽孢是细菌营养体在必需养料即将耗尽时，在细胞内形成的含水量极低、抗逆性极强的休眠体。

研究表明，芽孢杆菌所产生的芽孢具有耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂等多种抗逆性，由于芽孢极强的抗逆性，在工业机械化生产高温干燥的过程中，可以保证微生物菌剂的活性，提高其产品质量，并且其对人畜无害，不污染环境，所以在畜牧业、饲料行业中得到广泛应用。目前，从自然生境中筛选得到芽孢杆菌益生菌种在工业生产过程中普遍存在芽孢形成率不高、应用效果不稳定等问题。如何提高枯草芽孢杆菌产芽孢率已经成为限制芽孢杆菌微生态制剂发展的瓶颈问题之一。

中国专利文献CN102181389A公开了一种选育高产芽孢率芽孢杆菌的方法，该方法是根据芽孢的热稳定性特点，采用逐级加热处理后培养的手段，选育出高产芽孢率的芽孢杆菌。其步骤包括：芽孢杆菌激活、一级加热处理、一级培养、二级加热处理、二级培养、三级加热处理、三级培养与收集，得到所述高产芽孢率芽孢杆菌。上述方法虽然提高了芽孢杆菌的产芽孢率，但是此方法需要较长的培养时间，由激活并经过三级培养，每次至少3-5天，培养一次至少需要2周的时间，拉长了培养驯化的时间，并且经过培养后，还需要进行不同程度的热处理，需要谨慎的设置温度和时间，增加了控制成本。所以建立一种快速、高效并且工艺简单的提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法十分必要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中存在的选育高产芽孢率的芽孢杆菌培养时间长、操作复杂等问题，提供一种提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种提高芽孢杆菌产芽孢率的菌种驯化方法，包括以下步骤：

将芽孢杆菌活化；

将活化后的菌种依次按照从正常培养基到贫瘠培养基，然后再增加营养物质浓度到正常培养基中培养的顺序进行传代培养，培养基根据浓度设置3个以上，连续传代3代以上。

上述菌种驯化方法中，所述正常培养基为80-100％原始浓度的培养基，所述贫瘠培养基为12.5％-80％原始浓度培养基。

上述菌种驯化方法中，所述从正常培养基到贫瘠培养基再到正常培养基，逐步设置3-9个浓度梯度，从正常培养基到贫瘠培养基，后一浓度为前一浓度的12.5％-80％；从贫瘠培养基到正常培养基，前一浓度为后一浓度的12.5％-80％。

上述菌种驯化方法中，所述从正常培养基到贫瘠培养基再到正常培养基，逐步设置3-7个浓度梯度，从正常培养基到贫瘠培养基，后一浓度为前一浓度的12.5％-80％；从贫瘠培养基到正常培养基，前一浓度为后一浓度的12.5％-80％。

上述菌种驯化方法中，所述从正常培养基到贫瘠培养基再到正常培养基的顺序为：原始浓度培养基、50％原始浓度培养基、25％原始浓度培养基、12.5％原始浓度培养基、25％原始浓度培养基、50％原始浓度培养基、原始浓度培养基。