[发明专利]高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶活力的检测方法

说明书

本发明公开了一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶活力的检测方法，涉及溶菌酶活力检测分析检测技术领域。所述检测方法包括以下步骤：以溶壁微球菌菌液为底物，用比浊法，将待测珍禽蛋蛋清样品溶液加入酶促反应体系，在445‑455nm波长下测定菌液单位时间内吸光度降低值，按每分钟吸光度降低值下降0.001为一个活力单位计算溶菌酶活力；其中，采用0.05‑0.08mol/L pH＝6.0‑6.5的磷酸盐缓冲液溶解和/或稀释溶壁微球菌和待测珍禽蛋蛋清样品。本发明缓解了盐浓度过高会抑制酶活造成检测结果不准确的问题，该方法适合高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶酶活的检测，在该方法的各条件参数下测得的酶活结果更加准确。

技术领域

本发明涉及溶菌酶活力检测分析技术领域，具体而言，涉及一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶活力的检测方法。

背景技术

溶菌酶(Lysozyme)，又称胞壁质酶、N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，可选择性地分解微生物细胞壁的同时不破坏其它组织，且本身无毒无害，因而它是一种天然的安全性能很好的杀菌剂、防腐剂，在食品保鲜(特别是奶酪，清酒生产)、医药(眼药水、润喉液)、日化(牙膏、化妆品)、婴儿食品(母乳化奶粉)及科学研究中有着广泛的作用。溶菌酶广泛地存在于高等动物组织及分泌物、植物及各种微生物中，以在新鲜的鸡蛋清中含量最高。前期研究表明，以高原特种养殖珍禽蛋作为原料提取溶菌酶，可制得高活力的优质溶菌酶，在天然防腐剂市场可形成巨大的竞争力。

溶菌酶产品最主要的评价指标是酶活力。酶活力指在特定条件下，1分钟内转化1微摩尔底物所需的酶量为一个活力单位(U)，温度规定为25度，其他条件取反应的最适条件。溶菌酶的活力检测，较常用的测定方法有琼脂板扩散法、比浊法、比色法、高效液相色谱法等，国外近年来集中在比浊法测定溶菌酶活性。目前，现有的关于溶菌酶活性检的测定方法的规定或声明有以下三种—GBT25879-2010鸡蛋蛋清中溶菌酶的测定分光光度法，西药部颁标准中溶菌酶检测方法及食品添加剂联合专家委员会(JECFA)发布产品规范中溶菌酶检测方法。三种方法都采用比浊法，但是所采用的磷酸盐缓冲液浓度、计时区间、溶壁微球菌的OD₄₅₀值区间等不同，由于方法条件各异，结果差异较大，由于高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶含量较高，如果采用传统方法条件会造成检测结果不准确，例如盐浓度过高会抑制酶活而影响结果，需要对测定方法中各条件进行重新探索，因此建立一种适用于高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶活力的检测方法十分必要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶酶活的检测方法，缓解了盐浓度过高会抑制酶活造成检测结果不准确的问题，该方法适合高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶酶活的检测，在该方法的各条件参数下测得的高原特种养殖珍禽蛋蛋清中的溶菌酶酶活结果更加准确。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种高原特种养殖珍禽蛋蛋清中溶菌酶活力的检测方法，包括以下步骤：

酶促反应以溶壁微球菌菌液为底物，用比浊法，将待测珍禽蛋蛋清样品溶液加入酶促反应体系，在445-455nm波长下测定菌液单位时间内吸光度降低值，根据待测珍禽蛋蛋清样品溶液中溶菌酶浓度，按每分钟吸光度降低值下降0.001为一个活力单位计算溶菌酶活力；

其中，采用0.05-0.08mol/L pH＝6.0-6.5的磷酸盐缓冲液溶解和/或稀释溶壁微球菌和待测珍禽蛋蛋清样品，得到菌液和珍禽蛋蛋清样品溶液。

优选地，在本发明技术方案的基础上，采用0.06-0.08mol/L pH＝6.0-6.2的磷酸盐缓冲液溶解和/或稀释溶壁微球菌和待测珍禽蛋蛋清样品，得到菌液和珍禽蛋蛋清样品溶液；

优选地，采用1/15-1/14mol/L pH＝6.0-6.2的磷酸盐缓冲液溶解和/或稀释溶壁微球菌和待测珍禽蛋蛋清样品，得到菌液和珍禽蛋蛋清样品溶液。