[发明专利]用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种用于检测棉花MON15985转化体纯杂合的引物组，属于生物技术领域。所述引物组包括以下三条引物：15985‑GF：5’‑GCCCAACTCACTCATTTAGA‑3’，15985‑TR：5’‑TTCCTGACGGCAATCGACAC‑3’，15985‑GR：5’‑GGGCAAAGTTTTAACGTGGC‑3’。本发明还提供基于上述引物组的试剂盒、检测方法。本发明所提供的引物组可检测待测棉花个体材料中是否含有MON15985转化体，并鉴别出该品种中特定个体的纯杂合状态，适合于纯合度检测和育种选种。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

转基因棉花是全球种植的主要转基因作物之一，也是我国种植面积最大的转基因作物。2016年，我国转基因棉花种植面积为280万公顷，占棉花总种植面积约95％。

“保铃棉II”(Bollgard II，又名保铃棉MON15985)是孟山都公司开发的抗虫棉产品，首先于2002年在美国获得商业化种植批准，随后在澳大利亚、日本、新西兰、欧盟等国家地区获得批准用于食用或种植。2006年获得我国批准允许进口用作加工原料(农基安证字(2006)第052号)。

孟山都公司通过农杆菌介导转化法将cry1Ac基因插入到棉花品种Coker 312的基因组中得到了保铃棉MON531。而保铃棉MON15985是通过基因枪法进行再转化，将cry2Ab基因插入到保铃棉MON531的基因组中得到的。因此保铃棉MON15985含有两个不同转基因插入位点。

转基因性状与其他生物性状一样，可以根据其自交或杂交产生后代中的分离情况来判定其是纯合或杂合。在育种过程中，获得纯合体是一个非常关键的步骤，也是保证种子质量的重要的因素。传统的区分转基因植株纯杂合方法是通过检测自交产生的子一代是否发生分离以及计算分离比进行的，不仅耗时费力，而且浪费了子一代的宝贵资源。而快速高效地筛选纯合植株，可显著加快转基因植株的育种进程，因此鉴别转基因植株纯杂合方法具有重要的应用价值。

在分子水平上鉴别转基因植株纯杂合可以通过PCR方法扩增转基因插入位点序列和两端的基因组序列来鉴别单个植株或单粒种子的纯杂合状态。目前种植的棉花绝大部分属于陆地棉品种，陆地棉的基因组是异源四倍体，也就是由具有高度相似的两个二倍体组成。因此在鉴别转基因棉花的纯杂合时，插入位点基因组的扩增会受到其同源染色体上序列的干扰，鉴别比较困难。

发明内容

鉴于本领域存在的上述问题和需求，本发明比较了MON15985转化体插入位点的棉花基因组序列与其同源染色体序列差异，设计和验证了特异性的引物组合，建立了快速鉴定MON15985转化体纯杂合的方法，可检测待测棉花材料是MON15985转化体，并鉴别出特定个体的纯杂合状态。

本发明提供的技术方案如下：

本发明一方面提供了一种用于检测棉花MON15985转化体的引物组，其特征在于，包括以下三条引物：

15985-GF：5’-GCCCAACTCACTCATTTAGA-3’，

15985-TR：5’-TTCCTGACGGCAATCGACAC-3’，

15985-GR：5’-GGGCAAAGTTTTAACGTGGC-3’。