[发明专利]用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的引物组，其特征在于，由如下三条引物构成：

15985-GF：5’-GCCCAACTCACTCATTTAGA-3’，

15985-TR：5’-TTCCTGACGGCAATCGACAC-3’，

15985-GR：5’-GGGCAAAGTTTTAACGTGGC-3’。

2.用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于进行PCR扩增的常规试剂，和/或，用于进行电泳检测的常规试剂。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述用于进行PCR扩增的常规试剂包括：dNTP、DNA聚合酶、PCR缓冲液、超纯水，或包含上述物质的商品化PCR反应混合液；

所述用于进行电泳检测的常规试剂包括：电泳缓冲液、核酸染料、琼脂糖凝胶。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述用于进行电泳检测的常规试剂还包括DNA Marker；所述核酸染料指溴化乙锭；所述商品化PCR反应混合液指GreenMaster Mix。

6.用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的方法，其特征在于，包括：采用权利要求1所述的引物组，和/或，权利要求2-5任一所述的试剂盒对待测棉花材料的DNA进行PCR扩增。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：GreenMaster Mix 0.5μL/μL，引物0.5μmol/L，所述待测棉花材料的DNA模板0.1μL/μL，其余为超纯水；

所述PCR扩增的反应程序：95℃预变性4min，以95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s为1个循环，共进行35个循环，72℃保温10min。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，还包括：将所述PCR扩增结果进行电泳检测，判读电泳检测结果。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述电泳指：将PCR扩增产物置于质量体积比为0.8％的琼脂糖凝胶上，于120V电压下电泳20分钟；

所述判读电泳检测结果指：如果电泳结果仅出现225bp的条带，则待测的棉花材料样品含有纯合的MON15985转化体；

如果电泳结果同时出现225bp和153bp的条带，则待测的棉花材料样品含有杂合的MON15985转化体；

如果电泳结果仅出现153bp的条带，则待测的棉花材料样品不含有MON15985转化体。

10.权利要求1所述的引物组在制备棉花MON15985转化体检测试剂方面的用途，其特征在于，在标有棉花MON15985转化体检测用途的商品包装盒内放入如SEQ NO.ID 1-3所示的3条引物。