[发明专利]基于脂质体的囊泡分离效率评估和质控的方法

权利要求书

1.带有荧光或有色染料的脂质体在囊泡分离效率评估和质控中的应用；其中，所述带有荧光或有色染料的脂质体是将具有磷脂双分子层结构的脂质体与荧光染料或有色染料结合得到的；

其中，用于形成磷脂双分子层结构的脂质选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、胆固醇酯、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇及鞘磷脂中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂质体中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和胆固醇酯的摩尔比为5-8:1-3:1-3。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述脂质体中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和胆固醇酯的摩尔比为7:1.5:1.5。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述荧光染料选自Fluorescein DHPE、Fluorescein、Hydroxycoumarin、R-Phycoerythrin、FluorX，或用这些荧光染料修饰的脂质；

所述荧光染料修饰的脂质中荧光染料占脂质摩尔总量的1％～20％。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述荧光染料为Fluorescein DHPE。

6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述脂质体的粒径大小为30-1000nm，平均密度为1.06-1.23g/mL。

7.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述脂质体的制备方法包括以下步骤：

S1、通过恒压力控制挤出的方法制备脂质体：用密封的玻璃注射器将适量氯仿加入玻璃瓶内；然后用密封的玻璃注射器添加适量甲醇至相同的玻璃瓶内；然后将用于形成磷脂双分子层结构的各种脂质依次加入上述玻璃瓶内，再加入荧光或有色染料；用氮气挥发有机溶剂氯仿和甲醇直到观察到薄膜脂质在瓶底形成；将玻璃瓶放置在真空干燥器内以去除残留有机溶剂；然后向玻璃瓶中加入适量PBS缓冲液，通过过滤器或滤膜即可得到类似囊泡粒径大小的脂质体；

S2、游离荧光染料的去除：将上述得到的脂质体转入超速离心管，进行超速离心，弃上清，用PBS缓冲液重悬沉淀，4℃保存。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述脂质体的制备方法包括以下步骤：

1)通过恒压力控制挤出的方法制备脂质体：用250μL密封的玻璃注射器将50～150μL氯仿加入20mL玻璃瓶内；然后用100μL密封的玻璃注射器添加20～50μL甲醇至相同的玻璃瓶内；然后将10mg/mL磷脂酰胆碱150～250μL、10mg/mL磷脂酰乙醇胺30～50μL和11mg/mL胆固醇酯10～30μL依次加入上述玻璃瓶内；加入占磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和胆固醇酯总摩尔量1％～20％的Fluorescein DHPE；用氮气挥发有机溶剂氯仿和甲醇直到观察到薄膜脂质在瓶底形成；将玻璃瓶放置在真空干燥器内至少30分钟去除残留有机溶剂；然后向玻璃瓶中加入PBS缓冲液1～5mL，通过孔径50～800nm的过滤器或滤膜即可得到类似囊泡粒径大小的脂质体；

2)游离荧光染料的去除：将上述得到的脂质体转入超速离心管，100000～200000g进行超速离心，弃上清，用PBS缓冲液重悬沉淀，4℃保存。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述脂质体的制备方法的步骤2)具体为：将上述得到的脂质体悬浮液转入50KD或100KD的超滤管，用PBS缓冲液反复多次进行清洗超滤，以去除游离于脂质体外的荧光染料。