[发明专利]一种单细胞激光弹射基片、方法及应用

说明书

本发明涉及一种单细胞激光弹射基片及液相单细胞弹射方法，单细胞激光弹射基片依次包括基底层和镀膜层，其中镀膜层上偶联有氨基基团或特异性抗体。本发明解决了干燥处理造成细胞活性受损和动物细胞弹射分离的问题，优点是能够最大程度保持分离单细胞的活性，用于进一步培养，可实现对动物细胞的弹射分离；同时，能够结合其他观察、测量手段对单细胞进行定位、判断，以满足对特殊细胞如CTC细胞的选择性分选。

技术领域

本发明涉及单细胞分析及分选技术领域，具体涉及一种单细胞激光弹射基片及利用单细胞激光弹射基片进行液相单细胞弹射的方法。

背景技术

前期发展的基于脉冲激光的单细胞弹射技术作为一种能够在单细胞水平上对微生物细胞进行精确地定向分离手段，能够结合完善的细胞多模态观察和测量方法(如光学成像、拉曼光谱、荧光标记等)，同时耦合下游组学测序技术，弥补了FACS及其他一些技术的不足，因此，对于单细胞功能及遗传信息的精确解析具有极大潜力。然而，该技术在使用前，往往需要将细胞悬液滴涂于弹射基片表面进行干燥固定，因此仅适用于有细胞壁的微生物细胞，如细菌、酵母、微藻等；而干燥处理往往造成细胞活性减弱或丧失，对于动物细胞甚至造成细胞破裂，因此，前期技术对细胞活性影响较大，且无法用于对动物细胞的分离获取。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供了一种单细胞激光弹射基片和液相单细胞弹射的方法，解决了干燥处理造成细胞活性受损和动物细胞弹射分离的问题。

本发明提供一种单细胞激光弹射基片，依次包含基底层和镀膜层，其中镀膜层表面经化学修饰偶联有氨基基团或特异性抗体，所述单细胞激光弹射基片用于单细胞弹射分选。

所述基底层材料为光透明材料，包括硅酸盐玻璃、石英玻璃和氟化钙玻璃中的一种或多种。

所述镀膜层材料为透明金属复合氧化物薄膜材料，包括ITO(氧化铟锡)、FTO(氟掺杂氧化锡)、AZO(铝掺杂氧化锌)中的一种或多种。

所述基底的厚度为0.1-2mm，所述镀膜层的厚度为10-500nm。

所述氨基基团或特异性抗体，用于结合单细胞。

所述氨基基团通过静电吸附方式结合单细胞。

所述特异性抗体通过免疫结合方式结合单细胞。

所述特异性抗体能够与单细胞表面所具有的抗原位点特异性结合，特异性抗体种类因单细胞不同而异。

特异性抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。

所述氨基基团或特异性抗体为单分子层。

所述氨基基团或特异性抗体通过共价反应与镀膜层偶联。

所述单细胞为细胞膜完整且活性不丧失的人或动物来源的细胞。

本发明提供一种利用单细胞激光弹射基片进行液相单细胞弹射的方法，包括以下步骤：

1)将细胞悬液滴涂于单细胞激光弹射基片表面并孵育；

2)冲洗除去单细胞激光弹射基片上未被结合的细胞，并使细胞始终处于液相环境中；

3)利用显微镜观察识别结合于单细胞激光弹射基片上的细胞，采用脉冲激光进行单细胞弹射，使单细胞脱离单细胞激光弹射基片表面；

4)使用接收装置接收被分离的单细胞。

所述液相环境为中性等渗溶液，优选地，为PBS溶液、盐溶液、蔗糖溶液或细胞培养液中的一种或多种。

所述孵育的时间为10-30分钟。

所述结合方式包括静电吸附或免疫结合。

所述显微镜包括正置显微镜。