[发明专利]一种静注免疫球蛋白的生产工艺

说明书

本发明提供了一种静注免疫球蛋白的生产工艺，其是从健康人血浆中分离得到组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ/Ⅱ+Ⅲ；然后经辛酸沉淀过滤得到澄清液；并将澄清液依次通过以下层析：阴离子层析A、阴离子层析B、亲合层析C；层析后的流涤液进行超滤浓缩或稀释后配制，然后经纳米膜过滤，低pH值孵放，孵放后将溶液混合、配制、除菌得静注免疫球蛋白。本发明提供的生产工艺能够获得收率和纯度均较高的IgG产品，更为关键的是所得产品的抗A、抗B指标和ACA指标均大大降低，很好符合了《中国药典》的要求，而且样品的渗透压摩尔浓度也很好符合要求。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及一种静注免疫球蛋白的生产工艺。

背景技术

免疫球蛋白(Ig)是人体免疫系统的重要组成部分，是一类具有抗体活性的动物蛋白，其在人体中发挥着识别细菌、病毒以及活化补体的重要作用。人血浆中的免疫球蛋白可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类，其中主要是IgG。IgG最显著的特点是能够特异性地识别抗原，并与之结合形成复合物，复合物被吞噬细胞吞噬后，使抗原失去毒性和致病性。自从Cohn研制出了乙醇沉淀法，富集免疫球蛋白成分的人血浆用于各种感染或者先天性缺陷疾病的治疗手段已被广泛研究和使用。

目前国内外获取免疫球蛋白主要是从血浆或组分Ⅱ中纯化制备，而很少有从组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ或Ⅱ+Ⅲ中提取制备的，这是因为组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ或Ⅱ+Ⅲ的成分复杂，分离提纯难度大，不易分析。

获得免疫球蛋白尤其是IgG浓缩物的方法，除了用乙醇使蛋白选择性沉淀，也可以包含其它各种方法，例如聚乙二醇沉淀法，蛋白水解酶法等，通常生产方法为低温乙醇离心(压滤)法，产品收率低，纯度低，稳定性不好。

为了提高IgG产品的收率和纯度，国内外学者已进行了大量的研究工作，其中主要以采用两步压滤和二步层析以及一步层析的方法为主，基本可以获得较高的产品收率和纯度。中国专利CN 103554253B公开了一种静注人免疫球蛋白的制备方法，其通过两步压滤分离出Ⅱ+Ⅲ沉淀，低温乙醇压滤去除组分Ⅲ沉淀，然后通过两步层析得到的产品生物活性、收率和纯度较高，产品得率每升血浆不低于6.5g，产品纯度达到99％以上但是该专利并未对抗A和抗B进行检测，由于没有采用专用的去除抗A、抗B凝胶，因此其所得IgG产品中抗A和抗B抗体的含量较高，容易超出《中国药典》规定。中国专利CN 103394084B提供了一种除去抗A、抗B抗体以及多反应性免疫球蛋白IgG的免疫球蛋白G浓缩物，较好地去除了抗A和抗B抗体，所获得的IgG浓缩物中含抗A抗体不超过23ng/mg，特别是在19和23ng/mg之间；含抗B抗体不超过20ng/mg，特别是在12和20ng/mg之间，但是其未对产品收率和纯度进行考察。现有研究结果表明，要想获得较高收率和纯度的IgG产品以及很好去除抗A、抗B抗体，对制备工艺有着较高的要求，现有工艺未能同时达到很好效果。

另外，现有的制备工艺还存在以下缺陷无法解决：1)当两次层析后的流穿液经纳米膜过滤，最终制品抗A、抗B指标达到《中国药典》(2010)要求的同时，ACA含量较高，经孵放后ACA指标难以符合标准；2)经辛酸沉淀处理再经两次层析后至超滤配制，渗透压摩尔浓度容易出现自然结晶，致使样品无法测出摩尔渗透压或者渗透压不符合标准，且容易使收率较低，洗涤峰拖尾较长且不易清洗层析柱。因此，需要提供能够解决上述问题的IgG生产方法，不仅能获得较高收率和纯度的产品，而且最终制品中抗A、抗B指标和ACA指标均能符合《中国药典》(2010)规定。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述技术问题，而提供一种静注免疫球蛋白的生产工艺，该生产工艺不仅能够获得收率和纯度均较高的产品，更为关键的是所得产品的抗A、抗B指标和ACA指标均大大降低，很好符合了《中国药典》(2010)的要求。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种静注免疫球蛋白的生产工艺，包括以下步骤：

(1)从血浆中分离得到组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ或者分离得到组分Ⅱ+Ⅲ；