[发明专利]一种静注免疫球蛋白的生产工艺

权利要求书

1.一种静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从血浆中分离得到组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ或者分离得到组分Ⅱ+Ⅲ；

（2）辛酸沉淀：采用辛酸对组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ或者组分Ⅱ+Ⅲ进行沉淀处理，然后过滤得到澄清液；

（3）层析A：将澄清液过滤浓缩至蛋白含量为2～20 g/L；然后过阴离子层析柱A，所述阴离子层析柱A选自Fractogel EMD DEAE或CaptoQ或UNO sphere Q阴离子层析柱，层析条件为：pH 4.50～5.50，5～20 mM醋酸钠缓冲液，电导0.5 ms/cm～2.0 ms/cm，以线速度60～150 cm/h平衡、上样；

层析B：将流穿洗涤混合液或辛酸沉淀所得澄清液过阴离子层析柱B，所述阴离子层析柱B选自Fractogel EMD TMAE或CaptoQ XP或Nuvia HR Q阴离子层析柱；层析条件为：pH5.50～6.50，5～20 mM醋酸钠缓冲液，电导0.5ms/cm～2.5 ms/cm，以线速度60～150 cm/h平衡、上样；

层析C：将流穿洗涤混合液用缓冲液超滤浓缩至蛋白含量为30～50g/L；所述缓冲液为：pH 5.00～6.00、浓度为5～20mM的醋酸盐或柠檬酸盐或磷酸盐+80～150mM NaCl；然后超滤透析pH至与缓冲液一致，上层析柱C进行亲合层析，所述层析柱C选自Eshmuno P Anti-A/Anti-B混合柱或Eshmuno P Anti-A柱或Eshmuno P Anti-B柱；所述亲合层析的条件为：在缓冲液条件下以线速度70～130 cm/h平衡、上样；

上述层析操作包括按层析A+层析B+层析C进行层析操作，或者按层析A+层析C进行层析操作，或者按层析B+层析C进行层析操作；

（4）超滤浓缩或稀释、病毒灭活、配制分装，用甘氨酸或脯氨酸进行配制，得到静注免疫球蛋白。

2.根据权利要求1所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，层析A中阴离子层析柱A装18 ~23cm高阴离子凝胶，凝胶载量为300～700g沉淀/400 mL凝胶。

3.根据权利要求1所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，层析B中阴离子层析柱B装18～23 cm高阴离子层析凝胶，凝胶载量为300～700 g沉淀/400 mL凝胶。

4.根据权利要求1所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，层析C中Eshmuno PAnti-A/Anti-B混合柱或Eshmuno P Anti-A柱或Eshmuno P Anti-B柱均以Eshmuno PAnti-A和/或Eshmuno P Anti-B亲合凝胶装5～25 cm高柱；所述Eshmuno P Anti-A/Anti-B混合柱是以Eshmuno P Anti-A和Eshmuno P Anti-B亲合凝胶按1～2:2～3比例混合后装柱。

5.根据权利要求1-4任一项所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，层析B中是先将流穿洗涤混合液用缓冲液调节pH后于2～8 ℃下静置1 h以上，然后过滤得到上清液，再将上清液过阴离子层析柱B。

6.根据权利要求1-4任一项所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，步骤（1）中是先获得组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀或者组分Ⅱ+Ⅲ沉淀，其操作为将健康人血浆经低温乙醇反应后制备得到组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀或者组分Ⅱ+Ⅲ沉淀。

7.根据权利要求6所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，获得组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀或者组分Ⅱ+Ⅲ沉淀后再进行溶解，其操作为将组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀或者组分Ⅱ+Ⅲ沉淀用5～25倍的注射用水分步溶解，控制溶解液温度为2～25 ℃，调节pH至4.00～5.00，搅拌1h以上。

8.根据权利要求7所述的静注免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于，在用注射用水分步溶解过后，进一步将溶解液用NaOH调pH至 4.80～5.80，然后滴加辛酸至终浓度为10～30mM，辛酸滴加完毕后用NaOH调回pH至4.80～5.80，继续搅拌至少1 h后过滤，得到辛酸沉淀后的澄清液。