[发明专利]一种高产胞外多糖菌株及其多糖分离纯化方法

权利要求书

1.一种高产胞外多糖菌株，其为柠檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B-2，于2017年12月04日保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.15014。

2.一种高产胞外多糖菌株胞外多糖的分离纯化方法，其特征在于，采取如权利要求1所述的胞外多糖菌株，包括以下步骤：

(1)将柠檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B-2接种于产糖发酵培养基中培养得到发酵液，将发酵液进行低温高速离心，去除菌体，取上清；

(2)将离心去除菌体后的上清用乙醇沉淀，静置，离心，取沉淀；

(3)将沉淀溶解于蒸馏水中，在溶液中加入三氯乙酸溶液以沉淀蛋白质，连续搅拌，离心，取上清液；

(4)将上清液用乙醇沉淀，静置，离心，取沉淀；

(5)将沉淀再溶解于蒸馏水中，进行透析，得到粗多糖溶液；

(6)将粗多糖进行凝胶柱层析，得到纯胞外多糖。

3.根据权利要求2所述的一种高产胞外多糖菌株的多糖分离纯化方法，其特征在于步骤(1)所述离心温度为4℃，离心时间为30～40min，离心转速为4000rpm。

4.根据权利要求2所述的一种高产胞外多糖菌株的多糖分离纯化方法，其特征在于步骤(2)所述乙醇浓度为95％，预冷温度为-20℃，乙醇:发酵液＝3:1，静置时间为12～24h，离心温度为4℃，离心时间为50～60min，离心转速为12000rpm。

5.根据权利要求2所述的一种高产胞外多糖菌株的多糖分离纯化方法，其特征在于步骤(3)中所述加入80％三氯乙酸溶液至终浓度为5％，连续搅拌3～4h，离心温度为4℃，离心时间为50～60min，离心转速为12000rpm。

6.根据权利要求2所述的一种高产胞外多糖菌株的多糖分离纯化方法，其特征在于步骤(4)中所述乙醇浓度为95％，预冷温度为-20℃，乙醇:上清液＝3:1，静置12h，离心温度为4℃，离心时间为50～60min，离心转速为12000rpm。

7.根据权利要求2所述的一种高产胞外多糖菌株的多糖分离纯化方法，其特征在于步骤(5)中所述透析为于4℃冰箱透析48h，每8h换水一次。

8.根据权利要求2所述的一种高产胞外多糖菌株的多糖分离纯化方法，其特征在于所述步骤(6)中所述采用葡聚糖凝胶G-100过滤层析对多糖进行纯化。