[发明专利]一种广西金花茶多糖肽的制备方法

权利要求书

1.一种广西金花茶多糖肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、脱脂：金花茶叶片清洗后粉碎，过20目筛，得金花茶粉末，取上述所得金花茶粉末10g，加入二氯甲烷和乙醇，二氯甲烷和乙醇体积比为3:2，70℃回流2h，得脱脂金花茶；

S2、提取：向步骤S1所得脱脂金花茶中加入蒸馏水和纤维素酶，用质量浓度为7％的柠檬酸溶液调节pH值至5.5，50℃酶解1h，高温灭酶，脉冲电场处理后超声提取1.5h，3层200目纱布过滤，收集滤液，滤渣加入蒸馏水后同法操作再提取一次，合并滤液，浓缩，得多糖肽溶液；

S3、醇沉：将步骤S2所得多糖肽溶液在不断搅拌中缓慢滴加无水乙醇，磁力搅拌30min后于4℃静置16 h，12000r/min高速离心，收集乙醇沉淀部分I，离心后的上清液再缓慢滴加无水乙醇，同法操作，收集乙醇沉淀部分II，合并两次收集到的沉淀部分，真空低温干燥，得多糖肽粗品；

S4、纯化：将步骤S3所得多糖肽粗品加蒸馏水微热溶解，离心除去不溶性杂质，通过聚丙烯酰胺凝胶柱层析，用含8mol/L NaCl的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液洗脱，蒸馏水透析10h，取袋内液进行浓缩，加入5倍体积的无水乙醇沉淀，离心，收集沉淀部分，冷冻干燥，即得；

所述步骤S2中蒸馏水加入量为300mL，纤维素酶加入量为40mg；

所述步骤S2中脉冲电场强度为15kV，频率为1500Hz，脉冲数为6；

所述步骤S2中超声提取温度为55℃，频率为40kHz；所述步骤S4中缓冲液pH为6.4，浓度为0.1mol/L；

所述步骤S1中二氯甲烷、乙醇的总体积与金花茶粉末加入量之比为7mL/g；

所述步骤S3中多糖肽溶液和无水乙醇的体积比为1:2，上清液和无水乙醇的体积比为1:1.5。