[发明专利]一种用于植物生长素分离纯化的层析柱及分离方法

权利要求书

1.一种分离纯化植物生长素的方法，其特征在于，使用层析柱，包括以下步骤：

1)将植物初提液注入层析柱，待生长素与植物生长素亲和蛋白充分结合后从纯化柱底部放出多余的液体，清洗柱床，酶切，收集柱床内溶液；

2)将收集的柱床内溶液浓缩干燥得到生长素与植物生长素亲和蛋白的混合物，复溶混合物，离心后取上清即可得到生长素溶液；

其中，所述层析柱的制备包括以下步骤：

将植物生长素亲和蛋白注入到树脂中，使亲和蛋白与树脂充分结合，清洗后得到固定有亲和蛋白的树脂；

将固定有植物生长素亲和蛋白的树脂注入到空的蛋白质纯化重力柱中，静置后即获得层析柱，其中，所述植物生长素亲和蛋白选自TIR1受体蛋白、TIR1-IAA共受体蛋白；植物生长素亲和蛋白上带有蛋白标签。

2.根据权利要求1所述的分离纯化植物生长素的方法，其特征在于，TIR1-IAA共受体蛋白为TIR1-IAA7共受体蛋白。

3.根据权利要求1所述的分离纯化植物生长素的方法，其特征在于，蛋白标签为GST标签。

4.根据权利要求1所述的分离纯化植物生长素的方法，其特征在于，植物初提液的制备步骤为：液氮速冻后用研磨法充分粉碎植物样品，加入缓冲液混匀，离心，上清即是植物初提液。

5.根据权利要求1所述的分离纯化植物生长素的方法，其特征在于，复溶混合物使用的溶剂为乙腈水溶液。

6.根据权利要求5所述的分离纯化植物生长素的方法，其特征在于，乙腈水溶液的质量分数为20％。

7.一种定量分析植物中生长素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)使用权利要求1～6任一项所述的方法分离纯化植物生长素；

2)使用液相-质谱联用仪检测分析分离纯化的植物生长素。