[发明专利]一种用于急性心肌梗死合并心脏破裂筛检的基因及其表达产物

说明书

本发明公开了一种用于急性心肌梗死合并心脏破裂筛检的基因及其表达产物，所述血小板因子4(PF4)基因及其表达产物在制备急性心肌梗死风险预测标志物和诊断制剂中的用途；所述急性心肌梗死合并心脏破裂预测标志物和诊断制剂采用常规PCR相对定量，荧光定量试剂盒、蛋白杂交、酶联免疫方法、基因芯片检测受试者或急性心肌梗死患者外周血中基因的表达水平；本发明首次提供了以PF4基因和/或基因的表达产物作为一种新的急性心肌梗死合并心脏破裂筛检标志物的用途；提供了以PF4基因或基因的表达产物一种新的急性心肌梗死合并心脏破裂风险预测和诊断方法，利用PF4基因及其表达产物制备急性心肌梗死合并心脏破裂风险预测标记物和诊断制剂。

技术领域

本发明属于生物化学与分子生物学技术领域，具体涉及一种用于急性心肌梗死合并心脏破裂筛检的基因及其表达产物。

背景技术

随着社会经济的发展、生活水平提高和人口老龄化，急性心肌梗死发病率及死亡率逐年上升，WHO预计到2030年时，急性心肌梗死所致死亡将占总体死亡13.4％，为全球的主要死亡原因；心脏破裂是急性心肌梗死的严重致死性并发症，死亡率高达75％以上，是急性心肌梗死早期死亡的主要原因，尸检数据显示，心脏破裂占急性心肌梗死死亡30％以上。然而，心脏破裂常发生突然，且常表现为猝死，因此，其相关临床试验极难进行。目前，缺少CR的预测和诊断方法。如何早期诊断并有效干预已成为近年来心血管急诊危重症学界亟待解决的重要临床问题。

发明人前期进行的外周血急性心肌梗死合并心脏破裂基因甲基化芯片显示：在急性心肌梗死合并心脏破裂患者和未发生心脏破裂患者间存在大量的差异甲基化基因。其中，PF4基因的启动子区甲基化水平显著升高，并且在现有研究中未见对PF4基因与心脏破裂的相关报道。发明人在前期研究成果的基础之上，通过扩大样本量，来进一步验证PF4基因在急性心肌梗死合并心脏破裂发病过程中的差异表达，并分析PF4基因促进心脏破裂的可能机制。本发明提供了一种新的急性心肌梗死合并心脏破裂风险预测和诊断治疗靶点，具有重要的临床应用意义和开发价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于急性心肌梗死合并心脏破裂筛检的基因及其基因表达产物。发明人前期进行的外周血急性心肌梗死合并心脏破裂基因甲基化芯片显示：在急性心肌梗死合并心脏破裂患者和未发生心脏破裂患者间存在大量的差异甲基化基因；其中，PF4基因的启动子区甲基化水平显著升高。发明人在前期研究成果的基础之上，通过扩大样本量验证，PF4在急性心肌梗死合并心脏破裂患者的血浆中表达显著升高。

进一步的，提供所述的PF4基因表达产物在血浆中表达水平的荧光定量检测方法。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

步骤一：准备荧光定量PCR检测中使用的PF4引物对序列，上游引物序列：5’TGTGTGAAGACCACCTC 3’，下游引物序列：5’CACGTAGGCAGCTAGT 3’；

步骤二：荧光定量PCR反应体系，20ul反应体系，每个反应包括：10ul SYBR PremixEx Taq TM；

步骤三：加入无核酸酶的双蒸水和cDNA模板，将步骤一所述准备的上、下游引物各取0.5ul(浓度为10umol/L)，并加入无核酸酶的双蒸水8ul，cDNA模板1ul；

步骤四：应用实时荧光定量PCR系统扩增，将步骤二和步骤三所述混合，在60-95℃下反应30-600s，进行40次循环；

步骤五：测量，以GAPDH基因为内参基因，将步骤四所述的所有样本重复测量≥3次，结果取均值；

步骤六：比较，将步骤五所述的每个样本所得循环阈值(Ct)以相对表达量2-ΔCt表示(ΔCt＝目的基因Ct-内参基因Ct)，并进行比较。