[发明专利]一种DNA甲基化检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明属于生物分析技术领域，具体涉及一种DNA甲基化检测试剂盒及其使用方法。所述试剂盒包括亚硫酸氢钠、对苯二酚、脱盐柱、0.3摩尔每升的氢氧化钠、醋酸铵、乙醇、三氨基甲烷盐酸盐、氯化钾、氯化镁、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、聚乙二醇辛基苯基醚、探针X、探针Y、探针X′、探针Y′、核酸外切酶I、核酸外切酶III、10×NEBufferI、硫酸铵、Cy5标记的报告探针、生物素标记的捕获探针、热稳定连接酶和605量子点。本发明试剂盒高灵敏度高、高特异性强、操作简单本，在胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)和非胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)位点都可以进行DNA甲基化检测。

技术领域

本发明属于生物分析技术领域，具体涉及一种DNA甲基化检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

DNA甲基化是人类基因组中高度表征的表观遗传修饰，经常发生在胞嘧啶/ 鸟嘌呤二核苷酸(CpG)岛的碳五位胞嘧啶残基，是通过DNA甲基转移酶催化一个甲基到胞嘧啶的碳5位置来实现的。每个胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG) 岛可能由几十到几百个胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)构成主要的基因启动子区域。启动子区域里胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)岛的甲基化可能导致对人体细胞多种功能调节的失控，包括DNA复制、DNA修复、基因转录、X染色体失活、基因组印记和细胞分化。而异常的DNA甲基化模式与各种遗传疾病和癌症密切相关，如前列腺癌、结肠癌、肺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、宫颈癌、甲状腺癌、视网膜母细胞瘤和血液肿瘤。最近的研究表明，非胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)位点的DNA甲基化(即胞嘧啶/腺嘌呤二核苷酸(CpA)、胞嘧啶/胸腺嘌呤二核苷酸(CpT)和胞嘧啶/胞嘧啶二核苷酸(CpC))在基因表达调控中也起着重要的作用。高水平的非胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)甲基化基因在人类成熟卵母细胞的基因组中与相应基因的表达水平相关。此外，通过识别甲基化胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)结合蛋白2(MeCP2)，5-甲基化胞嘧啶后面除鸟嘌呤核苷酸之外的碱基的甲基化(mCH，其中H＝A或T或C)可以在神经障碍综合征中调节神经元的基因表达。因此，DNA甲基化可以作为一个大规模发生事件的标志和各种疾病的潜在生物标志物，在胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸 (CpG)和非胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸(CpG)位点对DNA甲基化进行准确定量不仅对早期诊断、预后和癌症治疗有重要意义，在生化研究、新型药物的研发方面也具有重大意义。