[发明专利]一种快速检测微量氟虫腈的胶体金标试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种快速检测微量氟虫腈的胶体金标试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，其特征是：吸附层从测试端依次为吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜上喷涂有偶联氟虫腈的载体蛋白作为检测线，还设有用羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG抗体或SPA印制的质控线。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述金标抗体纤维层中的标记抗体为胶体金标记的抗氟虫腈单克隆抗体或多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：在吸附纤维层、金标抗体纤维层和吸水材料层上覆盖有保护膜，在吸附纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上偏向吸附纤维层一侧0.3-0.7cm处印制有样品标记线。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试纸条，其特征是：所述的偶联氟虫腈的载体蛋白的制备方法为，先利用水解法对氟虫腈进行结构改造：在强碱条件下，将氟虫腈中的氰基水解为羧基，得到CNT-COOH；再将CNT-COOH与BSA或OVA偶联，得到偶联氟虫腈载体蛋白的溶液。

5.根据权利要求4所述的试纸条，其特征是：所述的偶联氟虫腈的载体蛋白的制备方法具体为：

(1)将20mg氟虫腈标品溶于100μL丙酮中，搅拌下将氟虫腈的丙酮溶液逐滴加入到3mL0.1M的NaOH溶液中，60℃水浴反应24h，此时反应液由浑浊逐渐变为浅黄色澄清溶液，冷却至室温，然后在冰浴条件下，用0.1M盐酸调节反应液pH值为5，此时有浅黄色固体析出，减压抽滤，单蒸水洗涤，干燥，得到产物，命名为CNT-COOH；

(2)称取5mg CNT-COOH，溶于500μL二甲基甲酰胺中，搅拌下依次加入2.5mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1.5mg N-羟基琥珀酰亚胺，室温反应0.5h，使CNT-COOH活化；

(3)称取4.5mg BSA和5mg OVA分别溶于1mL磷酸盐缓冲液中，将250μL活化后的CNT-COOH溶液分别逐滴加入BSA和OVA的溶液中，搅拌下室温反应4h；用PBS透析3d，离心，收集上清，弃沉淀，即得到偶联氟虫腈的载体蛋白溶液，分装后保存于-20℃备用。

6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征是：所述的PBS透析期间多次换透析液，6-8次/天。

7.根据权利要求5所述的试纸条，其特征是：所述的离心的转速为5000r/min，时间为5min。

8.一种如权利要求4所述的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)偶联氟虫腈载体蛋白的制备

(2)抗氟虫腈单克隆抗体或多克隆抗体的制备；

(3)氟虫腈胶体金标记抗体的制备；

(4)羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG抗体的制备；

(5)用所得的氟虫腈载体蛋白偶联物在纤维素膜层上制成检测线，用羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG抗体或SPA在纤维素膜层上制备质控线；氟虫腈金标抗体用于制备金标抗体纤维层，然后依次安装支撑层、吸附层和保护层组装成试纸条。