[发明专利]一种糖化血红蛋白的检测方法

说明书

本发明公开一种糖化血红蛋白的检测方法，包括：采集全血，用去离子水稀释，形成稀释血样待测品；将稀释血样待测品与SA基质按照体积比为1:8混合，形成待测样品溶液；将待测样品溶液点在芯片靶板上，静置直至溶液完全干燥结晶；用飞行时间质谱仪检测待测品，获得待测样品在3000‑20000Da范围的质谱图，得到糖化血红蛋白质谱峰面积A和相应的非糖化血红蛋白质谱峰面积B；通过公式A/(A+B)*100％得糖化血红蛋白的占比。本发明方法采用MALDI‑TOF‑MS检测，通过质荷比的不同进行精准的定量分析，减少了由于糖基化基团的不同和糖化血红蛋白变异体的特殊差异导致的检测误差，保证了结果的准确性，提高了精确度。

技术领域

本发明涉及医用临床检测领域。更具体地，涉及一种糖化血红蛋白的检测方法。

背景技术

糖化血红蛋白(HbA1c)，是血液中红细胞内血红蛋白与血糖结合的产物。血糖通过弥散方式进入细胞内，无需胰岛素参与。血糖与血红蛋白结合过程缓慢且不可逆，在红细胞死亡之前一直存在，每个红细胞内都有血红蛋白，而红细胞的寿命为120天，所以糖化血红蛋白比例能反应测定前1-2个月的平均血糖水平。HbAlc是糖尿病病情进展及并发症评估的最重要指标之一。HbAlc的测定在临床上有着重要的意义，对I型糖尿病和妊娠期糖尿病的治疗有监控作用，还可以估计治疗效果、治疗适应性以及协助判断预后情况。

目前糖化血红蛋白的测量方法有两种，一种是基于糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白的电荷不同，如离子层析法、电泳法等。但操作繁琐、耗时长、受外界影响大、不同人员操作误差大。另一种方法是根据血红蛋白β链N末端糖化集团的特点，如亲和层析法、免疫法等。但在其他地方糖基化的血红蛋白分子(如赖氨酸侧链上的其他伯胺)和部分糖化血红的变异体，由于不同的保水性用现有方法会影响最终的检测结果。

因此，需要提供一种新的体外糖化血红蛋白的检测方法，已解决上述至少一个问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种糖化血红蛋白的检测方法，该方法是基于MALDI-TOF-MS的蛋白质组学技术，分析成本低，所需样本少，准确度高、灵敏度高、操作简单、误差小、耗时少。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

本发明提供了一种糖化血红蛋白的检测方法，包括以下步骤：

1)采集全血，用去离子水稀释200倍，形成稀释血样待测品；

2)将稀释血样待测品与SA基质按照体积比为1:8混合，形成待测样品溶液；

3)将待测样品溶液点在芯片靶板上，静置直至溶液完全干燥结晶；

4)在飞行时间质谱仪上进行质谱检测，获得待测样品在3000-20000Da范围的质谱图，得到糖化蛋白质谱峰面积A和相应的非糖化血红蛋白质谱峰面积B；

5)通过质谱峰面积计算得出糖化血红蛋白的比值为A/(A+B)*100％。

进一步，步骤4)当所述糖化蛋白为β链缬氨酸被糖基化的糖化蛋白(glycated-βHb)，相应的所述非糖化血红蛋白为β链携带缬氨酸的血红蛋白(βHb)；当所述糖化蛋白为α链携带精氨酸被糖基化的糖化蛋白(glycated-αHb)，相应的所述非糖化血红蛋白为α链携带精氨酸的血红蛋白(αHb)。

进一步，所述质谱检测时设置飞行时间质谱仪参数为加速电压20kv，聚焦质量15000，激光脉冲频率1kHz，激光脉冲能量12μJ。

进一步，所述飞行时间质谱仪是基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)。

进一步，所述SA基质是芥子酸溶于体积比为3:7的乙腈和质量浓度为0.1％的三氟乙酸混合液得到的，所述SA基质中芥子酸的终浓度为10mg/ml。