[发明专利]从尿液细胞直接逆分化为角质形成细胞干细胞的方法及利用逆分化的角质形成细胞干细胞的用于促进皮肤再生的组合物的制备方法

权利要求书

1.一种诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的组合物，其特征在于，包含：

(i)由Bmi1蛋白或编码Bmi1蛋白的核苷酸序列组成的核酸；以及

(ii)由dNP63a蛋白或编码dNP63a蛋白的核苷酸序列组成的核酸。

2.根据权利要求1所述的诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的组合物，其特征在于，上述尿液细胞为来源于尿液的体细胞。

3.根据权利要求1所述的诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的组合物，其特征在于，上述组合物包含插入有由编码Bmi1蛋白及dNP63a蛋白的核苷酸序列组成的核酸的表达载体。

4.根据权利要求1所述的诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的组合物，其特征在于，上述组合物包含引入有由编码Bmi1蛋白及dNP63a蛋白的核苷酸序列组成的核酸的病毒。

5.一种诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的方法，其特征在于，包括：

(a)步骤，从尿液分离培养尿液细胞；

(b)步骤，向培养的上述尿液细胞中引入由编码Bmi1蛋白及dNP63a蛋白的核苷酸序列组成的核酸；

(c)步骤，通过在角质形成细胞干细胞培养条件下培养引入有核酸序列的上述尿液细胞来诱导逆分化为角质形成细胞干细胞；以及

(d)步骤，从诱导逆分化为上述角质形成细胞干细胞的细胞中筛选具有与角质形成细胞干细胞相似的特性的逆分化角质形成细胞干细胞株。

6.根据权利要求5所述的诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的方法，其特征在于，在上述(b)步骤中，引入由编码Bmi1蛋白及dNP63a蛋白的核苷酸序列组合成的核酸是为了将插入有上述核酸序列的逆转录病毒感染在上述尿液细胞。

7.根据权利要求5所述的诱导尿液细胞逆分化为角质形成细胞干细胞的方法，其特征在于，在上述(c)步骤中，上述培养条件为在包含牛胎儿血清、胰岛素、皮质醇、霍乱毒素、T3、抗坏血酸、表皮生长因子、L-谷氨酰胺及青霉素链霉素的高血糖DMEM/F12 3：1培养基中培养。

8.一种从尿液细胞逆分化的角质形成细胞干细胞条件培养基或其培养液的制备方法，其特征在于，包括：

(a)步骤，从尿液分离培养尿液细胞；

(b)步骤，向分离培养的上述尿液细胞中引入由编码Bmi1蛋白及dNP63a蛋白的核苷酸序列组成的核酸；

(c)步骤，通过在角质形成细胞干细胞培养条件下培养引入有核酸序列的上述尿液细胞来诱导逆分化为角质形成细胞干细胞；

(d)步骤，从诱导逆分化为上述角质形成细胞干细胞的细胞中筛选具有与角质形成细胞干细胞相似的特性的逆分化角质形成细胞干细胞株；以及

(e)步骤，通过在无血清培养基中培养所筛选的上述逆分化角质形成细胞干细胞来获得条件培养基或其培养液。

9.根据权利要求8所述的从尿液细胞逆分化的角质形成细胞干细胞条件培养基或其培养液的制备方法，其特征在于，在上述(b)步骤中，引入由编码Bmi1蛋白及dNP63a蛋白的核苷酸序列组成的核酸是为了将插入有核酸的上述逆转录病毒感染在上述尿液细胞。

10.根据权利要求8所述的从尿液细胞逆分化的角质形成细胞干细胞条件培养基或其培养液的制备方法，其特征在于，在上述(c)步骤中，上述培养条件为在包含牛胎儿血清、胰岛素、皮质醇、霍乱毒素、T3、抗坏血酸、表皮生长因子、L-谷氨酰胺及青霉素链霉素的高血糖DMEM/F12 3：1培养基中培养。

11.根据权利要求8所述的从尿液细胞逆分化的角质形成细胞干细胞条件培养基或其培养液的制备方法，其特征在于，上述条件培养基包含由逆分化角质形成细胞干细胞生成的血管内皮生长因子、血小板衍生因子-AA及成纤维细胞生长因子。