[发明专利]热稳定性提高的phi29 DNA聚合酶突变体有效
| 申请号： | 201780086099.3 | 申请日： | 2017-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN110892067B | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 刘欢欢;郑越;周玉君;张曦;张周刚;董宇亮;章文蔚;徐崇钧;德马纳克·斯内扎娜 | 申请（专利权）人： | 深圳华大智造科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N15/63;C12P19/34 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 518083 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 热稳定性 提高 phi29 dna 聚合 突变体 | ||
1.一种蛋白质，为将phi29 DNA聚合酶的氨基酸序列的第470位氨基酸由缬氨酸突变为赖氨酸，且将第474位氨基酸由异亮氨酸突变为赖氨酸后，且保持其他的氨基酸序列不变得到的蛋白质；
所述phi29 DNA聚合酶为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。
2.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质的稳定性高于phi29DNA聚合酶。
3.根据权利要求2所述蛋白质，其特征在于：所述稳定性为热稳定性。
4.编码权利要求1-3中任一所述蛋白质的核酸分子。
5.下述a1）-a4）中的任一种生物材料：
a1）含有权利要求4所述核酸分子的表达盒；
a2）含有权利要求4所述核酸分子的重组载体；
a3）含有权利要求4所述核酸分子的重组菌；
a4）含有权利要求4所述核酸分子的转基因细胞系。
6.权利要求1-3中任一所述蛋白质或权利要求4所述核酸分子或权利要求5所述生物材料在制备phi29 DNA聚合酶中的应用。
7.权利要求1-3中任一所述蛋白质或权利要求4所述核酸分子或权利要求5所述生物材料在PCR扩增中的应用。
8.权利要求1-3中任一所述蛋白质或权利要求4所述核酸分子或权利要求6所述生物材料在测序中的应用。
9.权利要求1-3中任一所述蛋白质或权利要求4所述核酸分子或权利要求6所述生物材料在制备用于测序的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述产品为试剂盒。
11.一种提高phi29 DNA聚合酶稳定性的方法，包括如下步骤：将phi29 DNA聚合酶氨基酸序列的第470位和第474位进行突变；所述phi29 DNA聚合酶为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述稳定性为热稳定性。
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