[发明专利]用于快速产生用于细胞系开发的同源重组载体的DNA质粒在审

专利信息
申请号: 201780082232.8 申请日: 2017-11-03
公开(公告)号: CN110199020A 公开(公告)日: 2019-09-03
发明(设计)人: 奥斯卡·M·佩雷斯-莱亚尔 申请(专利权)人: 坦普尔大学-高等教育联盟
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12N15/70;C12N15/81;A01K67/027;C12N15/85
代理公司: 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 代理人: 郑斌;刘振佳
地址: 美国宾夕*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 同源重组载体 细胞 转基因动物 转基因DNA 基因治疗 药物筛选 遗传修饰 用户使用 靶标 纯合 可用 敲除 修饰 标签 测试 基因 开发 生产
【权利要求书】:

1.同源定向修复(HDR)供体载体,其包含核酸分子,其中所述核酸分子包含编码负选择标记的一个或更多个核苷酸序列和包含插入盒的核苷酸序列,其中所述插入盒包含待插入到细胞的基因组中的核酸序列。

2.权利要求1所述的HDR供体载体,其中所述插入盒包含选自以下的一种或更多种序列:细胞选择标记序列、蛋白质纯化标签、报道标记序列、外源基因序列、启动子序列、P2A接头序列、终止序列、mRNA稳定序列、报道标记序列、细胞选择标记序列或其组合。

3.权利要求2所述的HDR供体载体,其中所述插入盒包含选自以下的蛋白质纯化标签:几丁质结合蛋白(CBP)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、聚(His)、生物素/链霉亲和素、V5标签、Myc标签、HA标签、NE标签、His标签、Flag标签、Halo标签、Snap标签、Fc标签、Nus标签、BCCP、硫氧还蛋白、Snoopr标签、Spy标签、Isopep标签、SBP标签、S标签、Avi标签、钙调蛋白。

4.权利要求2所述的HDR供体载体,其中所述插入盒包含选自以下的报道标记:氯霉素-乙酰基转移酶(CAT)、β-半乳糖基转移酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶,碱性磷酸酶和荧光蛋白。

5.权利要求4所述的HDR供体载体,其中所述插入盒包含选自以下的荧光蛋白:绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)、mCherry、mRuby3、mtagBFP2和mClover3。

6.权利要求2所述的HDR供体载体,其中所述插入盒包含选自以下的细胞选择标记序列:ZeocinTM抗性标记、新霉素抗性标记、嘌呤霉素抗性标记、杀稻瘟素抗性标记和潮霉素抗性标记。

7.权利要求1所述的HDR供体载体,其中所述一种或更多种负选择标记包含ccdb基因。

8.权利要求1所述的HDR供体载体,其包含在所述插入盒侧翼的两个编码负选择标记的核酸序列。

9.权利要求8所述的HDR供体载体,其包含选自SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的核酸序列。

10.HDR载体,其包含核酸分子,其中所述核酸分子包含一个或更多个重组臂,其中重组臂包含与靶核苷酸序列具有同源性的核苷酸序列和包含插入盒的核苷酸序列,其中所述插入盒包含待插入到细胞的基因组中的核酸序列。

11.权利要求10所述的HDR载体,其中所述插入盒包含选自以下的一种或更多种序列:细胞选择标记序列、蛋白质纯化标签、报道标记序列、外源基因序列、启动子序列、P2A接头序列、终止序列、mRNA稳定序列、报道标记序列、细胞选择标记序列或其组合。

12.权利要求11所述的HDR载体,其中所述插入盒包含选自以下的蛋白质纯化标签:几丁质结合蛋白(CBP)、麦芽糖结合蛋白(MBP)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、聚(His)、生物素/链霉亲和素、V5标签、Myc标签、HA标签、NE标签、His标签、Flag标签、Halo标签、Snap标签、Fc标签、Nus标签、BCCP、硫氧还蛋白、Snoopr标签、Spy标签、Isopep标签、SBP标签、S标签、Avi标签、钙调蛋白。

13.权利要求11所述的HDR载体,其中所述插入盒包含选自以下的报道标记:氯霉素-乙酰基转移酶(CAT)、β-半乳糖基转移酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶,碱性磷酸酶和荧光蛋白。

14.权利要求13所述的HDR载体,其中所述插入盒包含选自以下的荧光蛋白:绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP)、mCherry、mRuby3、mtagBFP2和mClover3。

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