[发明专利]使用病毒的基因编辑方法在审
| 申请号： | 201780081780.9 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN110139676A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 孔令洁;M·施;H·陈;R·雁如·蔡 | 申请（专利权）人： | 应用干细胞有限公司 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;C12N15/00;C12N15/87;C07H21/04 |
| 代理公司： | 北京市君合律师事务所 11517 | 代理人： | 张怡;杜丹 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多核苷酸序列 靶位点 基因组 病毒 核酸 互补序列 同源臂 细胞 位点特异性 双链断裂 核酸酶 基因 引入 申请 | ||
1.一种将多核苷酸序列插入细胞的基因组的方法，所述方法包括：
在所述基因组的靶位置产生DNA双链断裂；和
向所述细胞引入病毒，其中所述病毒包含核酸，所述核酸含有所述多核苷酸序列或其互补序列，其中所述核酸不包含与所述靶位点对应的同源臂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸包含微同源臂。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒是双链DNA(dsDNA)病毒或在病毒生命周期中具有dsDNA中间体的病毒。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述病毒是腺相关病毒、逆转录病毒或慢病毒。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸是单链DNA(ssDNA)或双链DNA(dsDNA)。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸序列编码B结构域缺失的因子VIII。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述双链断裂是通过向所述细胞引入包含位点特异性核酸酶的组合物产生的。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述位点特异性核酸酶是CRISPR相关(Cas)核酸酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述组合物还包含导向至所述靶位点的CRISPR-Cas向导RNA。
10.根据权利要求7所述的方法，其中所述位点特异性核酸酶是转录激活因子样效应物核酸酶或锌指核酸酶。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶位点在编码区、安全港(safe-harbor)基因座或非编码区。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是人细胞。
13.一种用于将多核苷酸序列插入细胞的基因组的组合物，所述组合物包含：
能够在所述基因组的靶位点产生双链断裂的位点特异性核酸酶；和
病毒，所述病毒包含核酸，所述核酸含有所述多核苷酸序列或其互补序列，其中所述核酸不包含与所述靶位点对应的同源臂。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述核酸包含微同源臂。
15.根据权利要求13所述的组合物，其中所述病毒是双链DNA(dsDNA)病毒或在病毒生命周期中具有dsDNA中间体的病毒。
16.根据权利要求13所述的组合物，其中所述病毒是腺相关病毒、逆转录病毒或慢病毒。
17.根据权利要求13所述的组合物，其中所述核酸是单链DNA(ssDNA)或双链DNA(dsDNA)。
18.根据权利要求13所述的组合物，其中所述多核苷酸序列编码B结构域缺失的因子VIII。
19.根据权利要求13所述的组合物，其中所述位点特异性核酸酶是CRISPR相关(Cas)核酸酶，并且所述组合物还包含导向至所述靶位点的CRISPR-Cas向导RNA。
20.根据权利要求13所述的组合物，其中所述位点特异性核酸酶是转录激活因子样效应物核酸酶或锌指核酸酶。
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